产品分类

规格参数：

产品名称：DH5α 感受态细胞
规格 ：100ul*20、100ul*100
分类：克隆感受态细胞
用途：生化试剂（用于科研试验研究）
储存条件: -70℃保存，必须加干冰运输。自收货之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月。
外观:（性状） 干冰运输，单加10kg干冰费
单位: 袋

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注意事项：
1. 感受态细胞*在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？
答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。
感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？
答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。
操作方法：
1. DH5α感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15小时。

甲胎蛋白单克隆抗体（包被） AFP(A2) 0.1ml
甲胎蛋白单克隆抗体(检测) AFP(A4) 0.1ml
ADP核糖基化因子结合蛋白1抗体 ARFIP1 0.1ml
芳香烃受体抗体 AHR 0.1ml
吸引素抗体 ATRN 0.2ml
腺苷三磷酸结合盒转运体A1抗体 ABCA1 0.1ml
蛋白激酶B2 AKT2 0.1ml
生成素2抗体 Angiopoietin 2 0.1ml
芳香化酶/细胞色素P450/雌激素合成酶抗体 Aromatase 0.1ml
腺苷A2A受体抗体 Adenosine Receptor A2a 0.1ml
蛋白激酶A锚定蛋白95抗体 AKAP95 0.1ml
顶膜钠依赖性胆盐转运体蛋白抗体 ASBT 0.1ml
去整合素样金属蛋白酶8抗体 ADAM8 0.2ml
芳香乙酰胺脱乙酰基酶样蛋白3抗体 AADACL3 0.2ml
ACN9蛋白抗体 ACN9 0.2ml
双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（N端） ADAR1 (N-terminus) 0.2ml
腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体 AMPK alpha 2 0.1ml
腺苷酸激酶抗体 ADK 0.1ml
α2巨球蛋白样蛋白1抗体 α2ML1 A2ML1 0.1ml
细胞凋亡相关蛋白3抗体 3-Apr 0.1ml
肌动蛋白α/α-SMA/α Actin抗体 Actin 0.1ml
ATP结合蛋白家族7抗体 ABCB7 0.2ml
ASCL2蛋白抗体 ASCL2 0.2ml
磷酸化脊髓蛋白1抗体 phospho-Ataxin 1(Ser775) 0.1ml
磷酸化活化转录因子1抗体 phospho-ATF1 (Ser63) 0.1ml
磷酸化活化复制因子2抗体 phospho-ATF2 (Ser480) 0.1ml
磷酸化活化复制因子2抗体 phospho-ATF2 (Thr51 + Thr53) 0.1ml
磷酸化活化复制因子2抗体 phospho-ATF2 (Thr69 + Thr51) 0.1ml