PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：鸡喉病毒即禽病毒1型PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Tokinolide B  112966-16-2  中文名：  分子式：C24H28O4    组织KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病毒定性检测试剂盒20次

Methyl 4-O-feruloylquinate  195723-10-5  中文名：  分子式：C18H22O9    HumanPlacealalkalinepkosphatase,PLAPELISAKit人胎盘碱性0酸酶(PLAP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Trehalose  99-20-7  中文名：海藻糖  分子式：C12H22O11    兔子脱氧酚/脱氧啉(DPD)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Chlorogenic acid  327-97-9  中文名：绿原酸  分子式：C16H18O9    Human plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA Kit 人纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA试剂盒

Ethyl rutinoside  187539-57-7  中文名：芸香糖乙苷  分子式：C14H26O10    HumansolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit 人可溶性白细胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
3,3-Dimethylacrylic acid  541-47-9  中文名：千里光酸  分子式：C5H8O2    兔子紧张素1型受体(AT1)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Campsiketalin  93675-96-8  中文名：  分子式：C10H20O4    Rat von Willebrand factor / ristocetin cofactor (VWF) ELISA Kit 大鼠性因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISA试剂盒

Macranthoin G  159934-13-1  中文名：灰毡毛忍冬素G  分子式：C26H26O12    Humanβ-Thromboglobulin,β-TGELISAKit 人β血小板球蛋白/β环蛋白(β-TG)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

5-O-Ethylcleroindicin D  488138-32-5  中文名：  分子式：C10H16O4    HumanDehydroepiandrosteroneS7,DHEA-S7ELISA试剂盒人脱氢表雄同S7(DHEA-S7)ELISA试剂盒规格：96T/48T

5-Hydroxymethyl-2-furoic acid  6338-41-6  中文名：5-羟甲基-2-糠酸  分子式：C6H6O4    组织ITK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
鸡喉病毒即禽病毒1型PCR检测试剂盒说明书生长激素释放因子-2  GHRP-2  质量规格：>95%,BR 人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)ELISA检测试剂盒Humanai-filaggrinaibody,AFAELISAKit 96T/48T

胰素样肽-2（1-34)，人  GLP-2 (1-34) (human)  质量规格：>95%,BR 大鼠热休克蛋白40(HSP-40)试剂盒 Rat heat shock protein 40,hSP-40 ELISA Kit

胰素（1-29），牛，人，猪  Glucagon (1 - 29), bovine,human, porcine  质量规格：>95%,BR 英文名称RatFollistatinELISAKit大鼠卵泡抑素(FS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

胰素（19-29），牛，人，猪  Glucagon (19 - 29), bovine,human, porcine  质量规格：>95%,BR 基质胶体法人体胚胎干细胞繁殖试剂盒10

胰素样肽Ⅰ（7-36）酰胺，人  Glucagon-Like Peptide I (7-36),amide, human  质量规格：>95%,BR ELISAKitCTX人细胞规格：48T/96T

激素释放激素相关蛋白（1-13），人  Gn-RH Associated Peptide (GAP) (1-13), human  质量规格：>95%,BR 小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA试剂盒 ，英文名： PARC/CCL18 ELISA Kit

海沙瑞林  Hexarelin  质量规格：>95%,BR 大鼠抗肌内膜抗体IgA(EMAIgA)ELISA检测试剂盒Ratai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgAELISAKit 96T/48T

组胺素5  Histatin 5  质量规格：>95%,BR 人白介素23(IL-23)试剂盒 Human Ierleukin 23,IL-23 ELISA Kit

恶性因子（1-34）酰胺，人  Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), amide, human  质量规格：>95%,BR 英文名称MousetotalhemolyticcomplemeELISAKit小鼠总溶血补体(CH50)规格：96T/48T

恶性因子（1-34）， 人  Hypercalcemia Malignancy Factor (1-34), human  质量规格：>95%,BR PDGF-A蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25
L鼠李糖 HPLC≥98% 100mg MouseHexokinase,HKELISA试剂盒小鼠己糖激酶(HK)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L丝氨酸 HPLC≥98% 200mg MouseHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISAKit小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L苏氨酸 HPLC≥98% 200mg MouseHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISA试剂盒小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L天冬氨酸 HPLC≥99% 200mg MousehighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISA试剂盒小鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L天冬酰胺 HPLC≥98% 200mg MouseHistamine,HISELISAKit小鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L缬氨酸 HPLC≥98% 200mg MouseHistamine,HISELISA试剂盒小鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L异亮氨酸 HPLC≥98% 200mg MouseHistoneDeacetylase,HDELISAKit小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L组氨酸 HPLC≥98% 200mg MouseHistoneDeacetylase,HDELISA试剂盒小鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L组氨酸盐酸盐 HPLC≥98% 200mg Mousehiston-H2bELISAKit小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Milataxel HPLC≥98% 20mg Mousehiston-H2bELISA试剂盒小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)ELISA试剂盒规格：96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。