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小麦麸质源性成分PCR检测试剂盒反应五要素

2022-08-15

小麦麸质源性成分PCR检测试剂盒反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

活化复制因子2抗体 ATF2
腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体 AMPK beta 1
糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体 Amylin
血管紧张素Ⅱ抗体 Angiotensin II
血管紧张素Ⅱ受体1抗体 AT2R
血管生成素-1抗体 Angiopoietin-1
膜粘连蛋白5抗体 Annexin V
重组膜粘连蛋白5抗体 Annexin V
衔接蛋白α-Adaptin抗体 alpha Adaptin
凋亡蛋白活性因子-1抗体(C端) APAF1(CT)
凋亡蛋白活性因子-1抗体(N端) APAF1(NT)
三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体 ABCG2
载脂蛋白E抗体 APOE
淀粉样肽前体蛋白抗体 Amyloid Precursor Protein
水通道蛋白-2抗体 Aquaporin 2
血管紧张素原抗体 AGT
雄激素受体抗体 Androgen receptor
细胞死亡调节蛋白抗体(凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制剂) AVEN
轴蛋白1抗体 Axin1
自噬相关蛋白9B抗体 ATG9B
自噬相关蛋白12抗体 Apg12
自噬相关蛋白13抗体 ATG13
自噬相关蛋白3抗体 ATG3
整合素样金属蛋白酶与凝血酶4型抗体 ADAMTS4
磷酸化活化复制因子2抗体 phospho-ATF2 (Ser490/498)
磷酸化APP(Tyr757)淀粉样肽前体蛋白抗体 phospho-Amyloid Precursor Protein (Tyr757)