MH-S细胞为半贴壁半悬浮生长的转化细胞系，对冻存与复苏过程较为敏感，因此规范的冻存操作是维持其活性、功能和遗传稳定性的重要保障。以下是详细的保存建议：
MH-S细胞冻存关键步骤
?选择合适时机?
在细胞处于?对数生长期、状态良好且未污染?时进行冻存，通常在传代前一晚换液，确保细胞健康活跃 。
?消化与收集细胞?
弃去旧培养基，用不含钙镁离子的PBS轻柔润洗一次。
加入0.25%胰酶-EDTA（T25瓶加1 mL），37℃消化1–2分钟，显微镜下观察细胞变圆即终止 。
加入含10% FBS的完全培养基终止消化，轻柔吹打混匀。
将悬浮细胞与消化后的贴壁细胞合并，1000 rpm离心5分钟，弃上清。
?配制冻存液?
推荐配方：
?55% RPMI-1640基础培养基?
?40% 胎牛血清（FBS）?
?5% DMSO（二甲基亚砜）?
注意：DMSO需现用现配，避免毒性积累；也可使用市售无血清冻存液替代 。
?重悬与分装?
用预冷的冻存液重悬细胞，调整密度至 ?5×10? ~ 1×10? cells/mL?。
分装至2 mL冻存管中，每管0.25–1 mL，标记细胞名称、代次和日期。
?程序降温?
将冻存管放入?程序降温盒?中（或置于-80℃冰箱过夜），再转入液氮长期保存。
若无程序降温设备，可采用梯度降温法：4℃ 30 min → -20℃ 2 h → -80℃ 2 h → 液氮 。
?长期储存?
?液氮气相中可长期保存?（>5年），避免直接浸入液相以防冻存管破裂或污染 。
建议每半年复苏一支检测细胞活性，确保冻存质量。
