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植酸含量测试盒微量法操作步骤

2022-09-05

植酸含量测试盒微量法操作步骤:

1. 样品的准备:

a. 细胞样品的准备:收集细胞,用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心,取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备:动物用生理盐水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心,取上清作为待测样品。

d. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P1511)测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大,该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

e. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量,用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如,小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定,可以冰浴保存;如果当天不能完成测定,可以-70 ℃冻存,但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 参照下表,根据待检测样品(包括标准品) 数量,配制适量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

注意:由于酶溶液的用量较少且易沉降,必须注意在使用前先轻轻离心一下,然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制:将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀,按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释,即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存,可当天使用,但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备:需自备SOD标准品,用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升,参考样品进行检测。说明:为避免稀释后SOD酶活性的下降, SOD标准品宜现稀释现使用;本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品,但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

小鼠白介素21(IL-21)ELISA试剂盒
小鼠白介素1受体拮抗剂(IL-1RA)ELISA试剂盒
小鼠白介素1β(IL-1B)ELISA试剂盒
小鼠白介素17(IL-17)ELISA试剂盒
小鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒
小鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒
小鼠L选择素(SELL)ELISA试剂盒
小鼠E-钙粘附分子(E-Cadherin/CDH1/CD324)ELISA试剂盒
小鼠E-钙粘附分子(E-Cadherin)ELISA试剂盒
小鼠CXC趋化因子配体1(CXCL1)ELISA试剂盒
小鼠CX3C趋化因子/fractalkine(FKN/CX3CL1)ELISA试剂盒
小鼠CD80分子(CD80/B7-1)ELISA试剂盒
小鼠CD30配体(sCD30 L)ELISA试剂盒
小鼠B细胞活化因子(BAFF/CD257/TNFSF13B)ELISA试剂盒
小鼠10kDa干扰素γ诱导蛋白(IP-10/CXCL10)ELISA试剂盒
小鼠10kDa干扰素γ诱导蛋白(IP-10)ELISA试剂盒
小鼠左右决定因子2(LEFTY2)ELISA试剂盒