人巨噬细胞刺激蛋白ELISA检测试剂盒实验原理
发表时间：2025-05-14
人巨噬细胞刺激蛋白（MSP）ELISA检测试剂盒的实验原理基于双抗体夹心法，通过特异性抗体对目标蛋白的高效捕获与检测实现定量分析。以下是实验过程的详细展开：
**1. 样本预处理与加样**
待测样本（血清、血浆或细胞培养上清）需经离心去除杂质，避免纤维蛋白原干扰。稀释后的样本与标准品同步加入预包被抗MSP单克隆抗体的微孔板中，37℃孵育1小时，抗体通过疏水作用与板壁牢固结合，形成固相免疫复合物。
**2. 洗涤与酶标抗体结合**
洗板机采用8道垂直冲洗，去除未结合蛋白后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗。该抗体针对MSP的不同表位设计，与捕获抗体构成"三明治"结构，确保检测特异性。45分钟温育过程中，酶标抗体与目标蛋白的浓度梯度呈正相关。
**3. 显色反应与终止**
TMB底物在HRP催化下发生氧化还原反应，生成蓝色产物。反应10分钟后，硫酸终止液使溶液转为黄色，此时450nm波长处的吸光度值与MSP浓度成正比。关键控制点包括：显色时间需精确至±15秒，避免强光直射导致底物降解。
**4. 数据分析与质量控制**
酶标仪自动绘制标准曲线（通常R2≥0.99），未知样本浓度通过四参数拟合计算。每板应设置空白孔（仅缓冲液）、阴性对照（不含MSP样本）及复孔（CV＜10%）。异常值需结合样本稀释线性（80%-120%回收率为合格）判断是否重测。
**注意事项**
? 溶血样本会释放血红素抑制HRP活性，需重新采集
? 板条开封后需密封防潮，避免抗体效价下降
? 冬季实验时建议预热洗液至25℃，防止洗涤不彻底
该技术可检测低至15pg/mL的MSP，为研究巨噬细胞活化机制及炎症性疾病提供精准工具。后续实验可结合Western Blot验证，或通过阻断实验确认抗体特异性。
