大鼠原代子宫内膜上皮细胞注意事项

大鼠原代子宫内膜上皮细胞注意事项：

1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。续写内容：

5. 细胞复苏后，建议先进行低密度传代（1:2或1:3），避免因运输应激导致细胞状态不佳而影响后续实验。传代时需使用预温的PBS轻柔洗涤，消化时间控制在1-2分钟（视细胞贴壁情况调整），加入含血清的培养基终止消化后，轻柔吹打至单细胞悬液，离心后重悬接种。首次传代后24小时内避免频繁移动培养瓶，以减少机械震动对细胞贴壁的影响。

6. 培养基更换频率需根据细胞密度和代谢情况调整，通常每48小时更换一次。若发现培养基迅速变黄（pH下降），可能提示细胞代谢旺盛或存在污染，需立即排查。建议使用原装配套培养基，若自行配制，需确保添加了适宜浓度的生长因子（如EGF、胰岛素等）及双抗（青霉素-链霉素混合液）。

7. 冻存备份是长期实验的重要保障。建议在细胞状态最佳时（对数生长期，融合度80%-90%）进行冻存，冻存液配方需含10%DMSO和90%胎牛血清，程序降温后转入液氮保存。每次冻存至少保留3管以上，并标注清晰代次、日期及操作人信息。

8. 实验人员需定期检查培养箱参数（37℃、5% CO?、饱和湿度），尤其是CO?浓度波动可能导致培养基pH异常。若细胞出现空泡化、颗粒增多或增殖停滞，需排查支原体污染（建议每月用荧光染色法检测一次），污染样本应立即灭菌废弃，并对培养环境彻底消毒。