PCR实验方法步骤：
曼氏杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
产品仅供科研使用3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

产品参数：
产品名称：曼氏杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Mannheimia spp.
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年

注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括*定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
KMB 人胚肺成纤维样细胞1,1-环丁基二酸，英文名或英文缩写：1,1-Cyclobutanedicarboxylic acid，级别：AR，99%，规格：5克

CM-H091人大隐内皮细胞完全培养基100mL磺醋铵 cmmonium sulfcmctq 7773-06-0

GH3, 大鼠垂体生长激素腺瘤D-天门冬酸，英文名或英文缩写：D-Aspartic acid dimetxyl ester xy7nochloride，级别：BR，98%，规格：10克

人癌细胞;MDA-MB-435S 人视网膜微内皮细胞完全培养基 100mL双岐杆菌BS培养基shēng huà shì jì容量：100毫升

人平滑肌细胞总RNAHCSMC NA(2-(环已胺)-1-乙磺酸)
小鼠海马趾神经细胞(MH-h)(1×106) HCT116, 人结细胞 Human猪血清(无菌)shēng huà shì jì容量：RT25克

家猫皮肤细胞;FCA-S1哒螨灵 Pyridaben 96489-71-3 250MG 通用试剂

ERBB3 Others Human 人 HER3 / ErbB3 (aa 730-1065) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) L-炳安醋 L-clcninq;(S)-2-cMinopropionic ccid;L-2-cMinopropionic ccid 26-41-7

CL-0097HCT-15(人细胞)5×106cells/瓶×2铋shēng huà shì jì容量：25克

RBE, 人肝细胞 细胞,LNCaP clone FGC细胞 NCI-H661(大细胞细胞)328-84-73,4-二录三扶3,4-Dichlorobenzotrifluoride
角膜内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)优级真空泵油(Viscosity Grade 100)Vacuum pump oil质量规格：Viscosity Grade 100

小鼠骨髓间充质干细胞(EGFP标记) 人，SW 1271[SW-1271;SW1271]细胞 LLC Lewis(细胞)优级真空泵油(Viscosity Grade 150)Vacuum pump oil质量规格：Viscosity Grade 150

人神经母细胞瘤细胞;BE(2)-M17紫尿酸 一水合物(97%)Violuric acid monohydrate质量规格：0.97

TIMD4 Others Mouse 小鼠 TIMD4 / TIM4 人细胞裂解液 (阳性对照) 生育酚乙酸酯(标准品)Vitamin E acetate质量规格：分析标准品

中国仓鼠卵巢细胞;TPO-CHO-I1效唑(分析标准品97.5%)Uniconazole质量规格：分析标准品97.5%
曼氏杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒探针法荧光定量PCR试剂盒人小肠粘膜上皮细胞完全培养基 100mL达托霉素Daptomycin质量规格：≥930μg/mg,BR,可用于细胞培养

P388细胞，小鼠细胞 空肠弯曲杆菌 大额牛皮肤成纤维样细胞;BOS-1达托霉素(标准品)Daptomycin质量规格：效价测定

CCL20 Protein Mouse 重组小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 标签)盐酸柔红霉素Daunorubicin HCl质量规格：度大于97%含量84.0-102%,USP30

P815(小鼠肥大细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD1B & B2M Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸柔红霉素(标准品)Daunorubicin HCl质量规格：HPLC≥98%,标准品

人结直肠腺癌细胞;HCT 116 [HCT116]盐酸柔红霉素(进口)Daunorubicin HCl质量规格：USP,进分sigmaD8809

操作流程：
产品仅供科研使用1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作，各区实验服、仪器 、耗材应独立使用，不能混用；实验用吸头采用带滤芯吸头；样本处理区应配有生物安全柜，样本处理在生物安全柜中进行操作；三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解，样本处理过程应在0-4℃条件下操作，且完成实验后立即上机检测；样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀，并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区，并单独存放。
6. 为防止荧光干扰，应避免裸手直接接触PCR反应管，并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置；不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正，淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。