帛科细胞培养器材的选择：从培养量大小来讲，从小到大有细胞培养板、细胞反应管、摇瓶、细胞培养瓶、细胞工厂等，更大就是反应器了。

产品简称：LN299细胞
中文名称：人细胞

规格：瓶

种属：人

来源：

培养基：DMEM

状态：贴壁

单位:

货号：E01009

帛科细胞培养瓶培养面积从25-225平方厘米不等，一般都经过表面改性处理，适合细胞贴壁和生长。225ml 、175ml的多用于大规模培养时用（如单克隆细胞的培养等），75ml的多用于一般性细胞实验用（一般性的传代，保存细胞，为实验提供细胞等），25ml一般是用来复苏细胞或细胞较少时的培养，还有做原代细胞时也可以做多瓶而避免交叉污染。产品仅用于科研
细胞培养的具体步骤和注意事项：
1.细胞复苏
将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。将融化的细胞移入离心管中，加入37oC预热的DMEM完全培养基中（其中胎牛血清约为10%），轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。
加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5% CO2的细胞培养箱中培养。
2.细胞传代
帛科细胞密度达到80%~90%（过量不足，过晚细胞状态不佳，1:2至1:10以上的比率传代培养，一般1:3至1:5细胞一代，即从细胞接种到分离再培养的一段时间，非细胞有丝分裂次数）时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。
加入胰蛋白酶（注意：消化液的量以盖住细胞*，*消化温度是37oC。显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度）进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。 
加入适量DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。
加入DMEM完全培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。

3.细胞冻存
当细胞密度达到80%~90%时，去掉完全培养基，用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。加入DMEM完全培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM完全培养基清洗，弃上清液。加入lml冻存液（90%胎牛血清，10% DMSO。 
一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整，冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养，另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质，如蔗糖，白蛋白等从而更好地保护细胞），放入冻存管内（管内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入4oC冰箱中冻存30min，然后放入-20oC冰箱中冻存30min，再置于-80℃冰箱内过夜。
*天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。 
细胞冻存和复苏的原则是：慢冻速融，这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂，会导致细胞内冰晶的产生，从而使细胞产生内源性的机械损伤，引起细胞内环境渗透压，PH，电解质等的改变，进而促使细胞死亡。

注意事项：
LN299细胞（1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热；
（2）用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；
（3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且减少污染；
（4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小；
（5）严格的无菌操作；
（6）贴壁细胞消化适度：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化；
（7）传代细胞所有的操作尽量靠近酒精灯火焰。每次*只进行一种细胞的操作，每种细胞使用一套器材。避免交叉感染；
（8）传代细胞瓶口每次打开或者关闭都需要在酒精灯上消毒。

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