基本信息：

定义与来源

- 定义：大鼠原代细胞是直接从大鼠组织或器官中分离、未经长期传代培养的细胞，保留了细胞在体内的原始生物学特性。
- 来源：常见供体为4-6周龄、体重150-200g的SD或Wistar大鼠，组织来源包括肝脏、肺、脑、肌肉等。

特点

- 生理相关性：与大鼠体内细胞功能高度相似。
- 有限增殖能力：体外传代次数通常不超过5-10代，避免传代过程中细胞特性丢失。
- 异质性：同一组织分离的细胞可能包含多种类型（如肝细胞与肝窦内皮细胞），需通过纯化（如密度梯度离心、流式细胞术）提高纯度。
- 伦理要求：需遵循实验动物伦理规范，确保来源合规。

分离与培养关键步骤

- 分离方法：
- 酶消化法：常用胶原酶、胰蛋白酶消化组织（如肝脏剪碎后用胶原酶IV消化），获得单细胞悬液。
- 机械分离法：适用于易碎组织（如脑组织），通过研磨、筛网过滤获取细胞。
- 培养条件：
- 培养基：根据细胞类型选择（如肝细胞用Williams E培养基，神经元用Neurobasal培养基），常添加胎牛血清（5%-10%）、生长因子（如EGF、bFGF）。
- 环境：37℃、5% CO?培养箱，贴壁细胞需铺基质（如胶原、纤连蛋白）促进贴壁。

注意事项：

该细胞只可用于科研。出现以下情况不予以重发：客户造成细胞污染；客户不正确操作致细胞状态不好；细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片；细胞培养时经其它处理；细胞收到2天内，未告知相关情况。

细胞操作步骤:

传代步骤：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1 - 2次。
加2ml消化液（0.25% Trypsin - 0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1 - 2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
按6 - 8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1 - 2mL培养液后吹匀。
将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
复苏步骤：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1 - 2mL培养基后吹匀。换液并检查细胞密度。
冻存步骤：
以T25瓶为例：
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1 - 2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
1000RPM离心5分钟去掉上清，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。
将冻存管置于程序降温盒中，放入 - 80℃冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存，记录冻存管位置以便下次拿取。
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