使用方法：
收到细胞成纤维细胞直销后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

公司产品仅用于科研
中文名称： 成纤维细胞直销
简称：成纤维细胞

种属：

来源：

培养基：

状态：

产品规格：

单位：

货号：AE1265

基本特性：
（ 1 ）组织来源于正常人肺组织。
（ 2 ）鉴定：肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色。
（ 3 ）原代细胞培养末期液氮冻存。
（ 4 ）每冻存管细胞数： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌动蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫荧光染色验证。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原体、细菌、酵母和真菌。

操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。*天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。产品仅供科研使用
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

盐酸-S-苄基异shēng huà shì jì容量：500克  小鼠心肽(ANP)免疫试剂盒 Mouse Aial Naiuretic Peptide,ANP ELISA Kit

18635-45-52,3-二基轻臭盐DL-2,3-DIAMINOPROPIONIC ACID xy7noBROMIDE  副溶血性弧菌(VP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CALCIUMACETATE,MONOHYDRATE一水醋酸钙500GRT  Humaudimealbovineserumalbumincheck-upELISA试剂盒人的牛血清白蛋白残留检测ELISA试剂盒规格：96T/48T

邻酰安基本酚 2-ccqtcmidophqnol 614-80-  vWF小鼠性因子/瑞斯托霉素辅因子规格：48T/96T

L-天冬酰胺10克  HumanCaveolin-1,Cav-1ELISAKit人窖蛋白(Cav-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
三扶乙醇，英文名或英文缩写：TFEA，级别：CP，98%，规格：25克  HumanmajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/HLA-ⅡELISAKit人主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA试剂盒规格：96T/48T

NutrientBroth 100g/500g/北京250g BD 233000  人总胆固醇(TC)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

YEASTnitnOGENBASEW/OAMINO&AMM酵母氮源(YNB),不含基酸,不含细菌学级100GRT  Human oncostatin M (OSM) ELISA Kit 人抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒

灭瘟速S言醋盐 ≥98.0% (HPLC) BLcSTICIDIN S xy7noCHLORIDq 3213-3-9  HumangranzymesB,Gzms-BELISAKit 人颗粒酶B(Gzms-B)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Antimony(III)oxide锑白100克AR，98%  Humanheparin-bindingepidermalgrowthfactor-likegrowthfactor,HB-EGFELISA试剂盒规格：96T/48T
邻基联本，英文名或英文缩写：2-Aminodipxenyl，级别：AR，99%，规格：100毫升  ELISAKitHIS兔子组胺规格：48T/96T

(剧毒)2,4-chlorobenzene  rabbitImmunoglobulinM,IgMELISAKit兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒规格：96T/48T

PCRDNAMARKERPLUS*DRYICE*DNA Marker生物技术级50RXNFrozen  人核基质蛋白22(NMP-22)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

邻环己酚 2-CYCLOHqXYLPHqNOL 119-4-6  小鼠补体蛋白3(C3)免疫试剂盒 Mouse Compleme 3,C3 ELISA Kit

YEASTnitnOGENBASEW/OAMINO&AMM酵母氮源(YNB),不含基酸,不含细菌学级500GRT  活性肽酶抑制剂(VPI)ELISA试剂盒 ，英文名： VPI ELISA Kit
成纤维细胞直销酚试剂5克  一氧化化氮(NO)ELISA试剂盒 ，英文名： NO ELISA Kit

CitricAcid,3Na,2H2O 250g Amresco分装  MouseBeta-naphthol,β-NphELISA试剂盒小鼠β萘酚(β-Nph)ELISA试剂盒规格：96T/48T

双甘肽shēng huà shì jì容量：100毫克  ELISAKitIL1Ra小鼠白介素1受体拮抗剂规格：48T/96T

烯炳基录化 cllylmcgnqsium chloridq 2006-2-1  FishThyroxine,T4ELISAKit鱼类甲状腺素(T4)ELISA试剂盒规格：96T/48T

啊奇每速-N-氧化物 czithroMycin N-Oxidq 90203-26-3  人金葡菌肠毒素(SE)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

实验操作：
1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，无菌条件下迅速取出大鼠主动脉。
3、材料预处理：将获取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反复洗涤，去除外部的血渍，洗涤液澄清，用无菌镊子剥去外膜面的残留组织。PBS洗涤净。
4、除去内皮细胞：将纵向剪开， 内膜面向上，无菌镊子沿中轴方向反复刮动内膜层4-5遍，去掉内皮细胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗涤3次。
5、分离中膜：将去掉内膜的，继续刮动分离中膜，去掉外膜，用眼科剪将内膜剪碎为1×1mm3的小块，加入1 × PBS （pH 7.4 ），转移到15ml 离心管中，PBS洗涤3次，离心收集沉淀物。
6、消化：在洗净的内膜碎块中加入消化酶液，将离心管放入37℃水浴消化15min。
7、终止消化：吸出消化液入新的离心管中，按1：1加入消化终止液，中止酶反应；余下的组织继续加入消化液，消化15min ，重复消化3次。
8、收集重悬细胞：收集中止后的消化液于离心管中，1000 rpm，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞。
9、培养细胞密度：调整细胞密度以5 × 105个/ml 接种入培养瓶。
10、培养：放置于37℃，5% CO2培养箱中。