PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：伞枝梨头霉PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Schleicheol 2  中文名：  分子式：C30H52O2    大鼠白三烯C4elisa试剂盒   大鼠白三烯C4试剂盒   规格型号：96T/48T   大鼠白三烯C4试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠白三烯C4试剂盒、大鼠白三烯C4 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  

Schleicheol 1  中文名：  分子式：C30H52O2    植物维生素C(VC)ELISAkit  

S-Benzyl-L-cysteine  中文名：S-苄基-L-半胱氨酸  分子式：C10H13NO2S    α-银环蛇(α-BGT)ELISAKit  

Sarsasapogenin  中文名：菝葜皂苷元  分子式：C27H44O3    大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coliP)ELISAKit  

Sarmentocymarin  中文名：  分子式：C30H46O8    霉(AFT)ELISAKit
Pregnenolone  145-13-1  中文名：孕烯醇酮  分子式：C21H32O2    People androstene two ketone (ASD) ELISA Kit 人雄(ASD)ELISA试剂盒

组织总0含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样              4-(4-Aminophenyl)morpholin-3-one  中文名：  分子式：C10H12N2O2 

组织因子抑制物 (TFPI)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Quinestrol  中文名：炔雌醇环戊醚  分子式：C25H32O2  度：98.0%

组织因子抑制物   英文名称：    tissue factor protein inhibitor   规格：   48T/96T   英文缩写：   TFPⅠ  Quinocetone  中文名：喹烯酮  分子式：C18H14N2O3 

组织因子   英文名称：    tissue factor   规格：   48T/96T   英文缩写：   TF  Quinocetone  中文名：喹烯酮  分子式：C18H14N2O3  度：98.0%
伞枝梨头霉PCR检测试剂盒直销油酸酰胺(>65.0%(GC))  Oleamide  质量规格：>65.0%(GC) 英文名称RatActi-vatedproteinCELISAKit大鼠活化蛋白C规格：96T/48T

正辛酰胺(>98.0%(GC)(N))  n-Octanamide  质量规格：>98.0%(GC)(N) 酵母菌SD-P/HIS培养基100毫升

硬脂酰胺(>90.0%(GC))  Stearamide  质量规格：>90.0%(GC) ELISAKitCA人酶规格：48T/96T

丁基邻苯二甲酰羟乙酸丁酯(>95.0%(GC))  Butyl Phthalyl Butyl Glycolate  质量规格：>95.0%(GC) 小鼠蛋白Z(PROZ)ELISA试剂盒 ，英文名： PROZ ELISA Kit

间苯二酸双(2-乙基己基)酯(>98.0%(GC))  Bis(2-ethylhexyl) Isophthalate  质量规格：>98.0%(GC) 人前白蛋白(PA)ELISA检测试剂盒Humanprealbumin,PAELISAKit 96T/48T

三戊酯(>98.0%(GC))  Triamyl Phosphate  质量规格：>98.0%(GC) 大鼠内皮型合成酶(eNOS/NOS3)试剂盒 Rat Endothelial niic oxide syhase,eNOS/NOS3 ELISA Kit

三(2-氯乙基)酯(>97.0%(GC))  Tris(2-chloroethyl) Phosphate  质量规格：>97.0%(GC) 英文名称RatBradykinin(BK)ELISAKit大鼠缓激肽酶联分析(BK)ELISAKit规格：96T/48T

三(1,3-二氯-2-丙基)酯(>95.0%(GC))  Tris(1,3-dichloro-2-propyl) Phosphate  质量规格：>95.0%(GC) 酵母菌SD-P/URA培养基100毫升

三(2-氧乙基)酯(>95.0%(GC))  Tris(2-butoxyethyl) Phosphate  质量规格：>95.0%(GC) ELISAKit亲环蛋白人肽酰脯氨酰异构酶规格：48T/96T

2-乙基己基二苯酯(>90.0%(GC))  2-Ethylhexyl Diphenyl Phosphate  质量规格：>90.0%(GC) 小鼠蛋白p53(TP53)ELISA试剂盒 ，英文名： TP53 ELISA Kit
7,8-二氢-L-生物蝶呤  7,8-Dihydro-L-biopterin  质量规格：美国进口 猪血纤蛋白原(Fbg)ELISA检测试剂盒PorcineFibrinogen,FbgELISAKit 96T/48T

生物蝶呤-d3  Biopterin-d3  质量规格：美国进口 猪血小板活化因子(PAF)ELISA检测试剂盒Porcineplateletactivatingfactor,PAFELISAKit 96T/48T

(6R)-四氢-L-硫酸生物蝶呤-d3(非对映)  (6R)-Tetrahydro-L-biopterin-d3 Sulfate(Mixture of Diastereomers)  质量规格：美国进口 猪(INS)ELISA检测试剂盒PorcineInsulin,INSELISAKit 96T/48T

(6S)-四氢-L-二硫酸生物蝶呤  (6S)-Tetrahydro-L-biopterin Disulfate  质量规格：美国进口 猪样生长因子1(IGF-1)ELISA检测试剂盒Porcineinsulin-likegrowthfactors-1,IGF-1ELISAKit 96T/48T

(6S)-四氢-L-硫酸生物蝶呤  (6R)-Tetrahydro-L-biopterin Sulfate  质量规格：美国进口 猪样生长因子2(IGF-2)ELISA检测试剂盒Porcineinsulin-likegrowthfactors2,IGF-2ELISAKit 96T/48T

四氢生物蝶呤(THB)二盐酸  Tetrahydrobiopterin (THB) dihydrochloride  质量规格：美国进口 猪样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA检测试剂盒Porcineinsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit 96T/48T

盐酸决奈达隆  Dronedarone HCl  质量规格：美国进口 猪载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA检测试剂盒PorcineapoproteinA1,apo-A1ELISAKit 96T/48T

盐酸决奈达隆-d6  Dronedarone-d6 HCl  质量规格：美国进口 猪载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA检测试剂盒PorcineapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 96T/48T

去丁基盐酸决奈达隆-d6  Desbutyl Dronedarone-d6 HCl  质量规格：美国进口 猪脂联素(ADP)ELISA检测试剂盒Porcineadiponectin,ADPELISAKit 96T/48T

O-脱芳香基雷诺嗪  O-Desaryl Ranolazine  质量规格：美国进口 猪主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/SLAⅡ)ELISA检测试剂盒swinemajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/SLAⅡELISAKit 96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。