PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：化脓放线菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Solvent Yellow 3  97-56-3  中文名：溶剂黄  分子式：C14H15N3  度：99.0%  关键词：    小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)ELISAKit  

Solanesol  13190-97-1  中文名：茄尼醇  分子式：C45H74O  度：%  关键词：  抗氧化; 抗菌; 烟草; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠c-fosELISAKit              

 prasterone sulfate  1099-87-2  中文名：去氢表雄酮硫酸钠盐  分子式：C19H27NaO5S  度：98.0%  关键词：    小鼠氧化型(ox-HDL）ELISA试剂盒  

 cholate  361-09-1  中文名：胆酸钠  分子式：C24H39NaO5  度：98.5%  关键词：  胆烷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠氧化型（ox-LDL）ELISA试剂盒  

Sitosteryl palmitate  2308-85-2  中文名：β-谷甾醇棕榈酸酯  分子式：C45H80O2  度：90.0%  关键词：  豆甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠氧化抗体(OLAb)ELISA试剂盒
8,14-Epoxyergosta-4,22-diene-3,6-dione  1265908-20-0  中文名：  分子式：C28H40O3    兔子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Schleicheol 1  256445-66-6  中文名：  分子式：C30H52O2    Human thymus leukemia aigen (TLa) ELISA Kit 人胸腺抗原(TLa)ELISA试剂盒

Uzarigenin digitaloside  61217-80-9  中文名：  分子式：C30H46O8    Humanpunjecellaoaibody,PCA-1/YoELISAKit 人抗浦肯野细胞抗体/抗Yo抗体(PCA-1/Yo)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Daturametelin I  904667-65-8  中文名：  分子式：C34H48O10    humanEndothelin1,ET-1ELISA试剂盒人内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

6-O-Methylcerevisterol  126060-09-1  中文名：  分子式：C29H48O3    组织PKCδ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
化脓放线菌PCR检测试剂盒说明书二苯并-15-冠5-醚(>95.0%(GC))  Dibenzo-15-crown 5-Ether  质量规格：>95.0%(GC) 大鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA检测试剂盒RatN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit 96T/48T

二苯并-21-冠7-醚(>96.0%(GC))  Dibenzo-21-crown 7-Ether  质量规格：>96.0%(GC) 人白介素11(IL-11)试剂盒 Human Ierleukin 11 ELISA KIT

4'-甲酰苯并-15-冠-5-醚(>98.0%(GC))  4'-Formylbenzo-15-crown 5-Ether  质量规格：>98.0%(GC) 英文名称MouseacetylcholinereceptoraibodyELISAKit小鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)规格：96T/48T

4'-甲酰苯并-18-冠-6-醚(>98.0%(GC))  4'-Formylbenzo-18-crown 6-Ether  质量规格：>98.0%(GC) PP2A蛋白共沉淀分析试剂盒5

4,7,13,21,24-六氧杂-1,10-二氮杂双环[8,8,8]-二十六烷(>98.0%(GC)(T))  4,7,13,16,21,24-Hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane  质量规格：>98.0%(GC)(T) Rabbitadramycin,ADRELISA试剂盒兔阿霉素(ADR)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2-(羟甲基)-12-冠4-醚(>95.0%(GC))  2-(Hydroxymethyl)-12-crown 4-Ether  质量规格：>95.0%(GC) 小鼠(LDL)ELISA 试剂盒

2-(羟甲基)-15-冠5-醚(>96.0%(GC))  2-(Hydroxymethyl)-15-crown 5-Ether  质量规格：>96.0%(GC) Rat urokinase (UK) ELISA Kit 大鼠尿激酶(UK)ELISA试剂盒

2-(羟甲基)-18-冠6-醚(>93.0%(GC))  2-(Hydroxymethyl)-18-crown 6-Ether  质量规格：>93.0%(GC) HumanHerpessimplexvirusⅠaibody,HSVⅠ-AbELISAKit 人单病毒Ⅰ型抗体(HSVⅠ-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

1,4,8,11-四氮杂环十四烷(>98.0%(T))  1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane  质量规格：>98.0%(T) HumanAspaateaminoansferase,GOT/GPTELISA试剂盒人天门冬氨酸转氨酶/谷草转氨酶(GOT/GPT)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1,4,7-三氮杂环壬烷三盐酸盐(>98.0%(N)(T))  1,4,7-Triazacyclononane Trihydrochloride  质量规格：>98.0%(N)(T) 植物源性食品山核桃(pecan)试剂盒20
AV-951  Tivozanib, AV951  质量规格：>98%,VEGFR抑制剂 小鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA检测试剂盒MouseCXC-chemokinereceptor3,CXCR3ELISAKit 96T/48T

7,8-二氢生物蝶呤  7,8-Dihydro-L-biopterin  质量规格：HPLC>95%,BR 小鼠C反应蛋白(CRP)ELISA检测试剂盒MouseC-ReactiveProtein,CRPELISAKit 96T/48T

整形素  Chlorflurenol-methyl  质量规格：>90%,BR 小鼠C型尿肽(CNP)ELISA检测试剂盒MouseC-typenaiureticpeptide,CNPELISAKit 96T/48T

帕拉米韦三水合物  Peramivir Trihydrate  质量规格：>98%,BR 小鼠ELISA试剂盒

神经保护剂NXY059  NXY-059,Cerovive  质量规格：>95%,BR 小鼠E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)ELISA检测试剂盒MouseE-Cadherin,E-CadELISAKit 96T/48T

L-犬尿氨酸(标准品)  L-Kynurenine   质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA检测试剂盒MouseE-SelectinELISAkit 96T/48T

磺胺二甲氧嗪; 磺胺二甲氧基嘧啶  Sulfadimethoxine   质量规格：>99%,AR 小鼠FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA检测试剂盒MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit 96T/48T

磺胺二甲氧基嘧啶(标准品)  Sulfadimethoxine   质量规格：HPLC>98%,标准品 小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)ELISA检测试剂盒MouseFMS-liketyrosinekinase3ligand,Flt-3LELISAKit 96T/48T

奥斯他伟酸;奥司他韦羧酸  Oseltamivir acid  质量规格：>97,BR 小鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA检测试剂盒MouseL-SelectinELISAkit 96T/48T

alpha-熊果苷(标准品)  alpha-Arbutin   质量规格：HPLC≥98%,标准品 小鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA检测试剂盒MouseN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit 96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。