PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：灭鲑气单胞菌PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Stavudine  3056-17-5  中文名：司他夫定  分子式：C10H12N2O4    HumanAi-SomaticMuscleAibody,ASAELISAKit 人抗骨骼肌抗体(ASA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Albendazole  54965-21-8  中文名：阿苯达唑  分子式：C12H15N3O2S    Humancytokeratin20,CK-20ELISA试剂盒人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Fmoc-O-(benzylphospho)-L-threonine  175291-56-2  中文名：Fmoc-苏氨酸磷酸苄酯  分子式：C26H26NO8P    组织HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性检测试剂盒20次

8-Phenyloctanol  10472-97-6  中文名：8-苯基辛醇  分子式：C14H22O    HumanPlateletFactor4,PF-4ELISAKit人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒规格：96T/48T

8-Phenyloctanoic acid  26547-51-3  中文名：8-苯基辛酸  分子式：C14H20O2    兔子脂联素(ADP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Deoxycholic acid  83-44-3  中文名：去氧胆酸  分子式：C24H40O4    Human neonatal thyroid stimulating hormone (N-TSH) ELISA Kit 人新生儿促甲状腺素(N-TSH)ELISA试剂盒

Timosaponin AIII  41059-79-4  中文名：知母皂苷AIII  分子式：C39H64O13    Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit 人抗多发性肌炎抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Diosgenin  512-04-9  中文名：薯蓣皂苷元  分子式：C27H42O3    HumanEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISA试剂盒人腺来源的内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Sarsasapogenin  126-19-2  中文名：菝葜皂苷元  分子式：C27H44O3    组织PIM2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Makisterone A 20,22-monoacetonide  245323-24-4  中文名：  分子式：C31H50O7    humanPepsinogenA,PG-AELISAKit人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒规格：96T/48T
灭鲑气单胞菌PCR检测试剂盒直销1--4-正辛基苯(>98.0%(GC))  1-Bromo-4-n-octylbenzene  质量规格：>98.0%(GC) 英文名称RatThyroglobulinELISAKit大鼠甲状腺球蛋白(TG)ELISA试剂盒规格：96T/48T

2,3,6,7,10,11-六甲氧基三亚苯(>95.0%(GC))  2,3,6,7,10,11-Hexamethoxytriphenylene  质量规格：>95.0%(GC) 酵母二酚氧化酶(diphenolase)活性比色法定量检测试剂盒20

2,3,6,7,10,11-六羟基三亚苯水合物(>95.0%(HPLC))  2,3,6,7,10,11-Hexahydroxytriphenylene Hydrate  质量规格：>95.0%(HPLC) ELISAKitHAase人透明质酸酶规格：48T/96T

2,3,6,7,10,11-六乙酰氧基三亚苯(>98.0%(HPLC))  2,3,6,7,10,11-Hexaacetoxytriphenylene  质量规格：>98.0%(HPLC) 小鼠第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒 ，英文名： FⅧAg ELISA Kit

2,3,6,7,10,11-六三亚苯(>98.0%(T))  2,3,6,7,10,11-Hexabromotriphenylene  质量规格：>98.0%(T) 大鼠TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)ELISA检测试剂盒RatTGF-beta-inducibleearlyresponsegene-1,TIEG1ELISAKit 96T/48T

(S)-(-)-1-苯乙醇(>98.0%(GC))  (S)-(-)-2-Methyl-1-butanol  质量规格：>98.0%(GC) 人白介素12受体亚基β-1(IL12RB1/IL12R/IL12RB)试剂盒 Human IL12RB1 ELISA kit

(S)-(+)-4-甲基-1-己醇(>98.0%(GC))  (S)-(+)-4-Methyl-1-hexanol  质量规格：>98.0%(GC) 英文名称MouseFree-TestoteroneELISAKit小鼠游离睾同(Free-Testoterone)规格：96T/48T

(S)-(+)-5-甲基-1-庚醇(>96.0%(GC))  (S)-(+)-5-Methyl-1-heptanol  质量规格：>96.0%(GC) picricacid-orangeGsolion溶液500毫升

(S)-(+)-6-甲基-1-辛醇(>98.0%(GC))  (S)-(+)-6-Methyl-1-octanol  质量规格：>98.0%(GC) Rabbit8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2αELISA试剂盒兔8-异构素(8-epi-PGF2α)ELISA试剂盒规格：96T/48T

(S)-(+)-2-辛醇(>98.0%(GC))  (S)-(+)-2-Octanol  质量规格：>98.0%(GC) 小鼠抵抗素(RETN)ELISA试剂盒 ，英文名： RETN ELISA Kit
CBZ-D-缬氨酸  N-Cbz-D-valine  质量规格：0.98 人基质细胞衍生因子1a(SDF1A)试剂盒 Human somal cell-derived factor 1 alpha,SDF1A ELISA kit

Z-Arg(Mtr)-OH·CHA  Z-Arg(Mtr)-OH·CHA  质量规格：0.98 人基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/SDF1B)试剂盒 Human somal cell derived factor 1β,SDF-1β/SDF1B ELISA kit

CBZ-L-赖氨酸甲酯盐酸盐;N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸甲酯盐酸盐  H-Lys(Z)-OMe hydrochloride  质量规格：HPLC>98% 人激动异构酶/细胞分裂素MB(CKMB)试剂盒 Human cytokinin MB,CKMB ELISA Kit

N-CBZ-D-丙氨酸  Z-D-Ala-OH  质量规格：>98%,BR 人激素敏感性脂肪酶(HSL)试剂盒 Human hormone sensitive lipase,HSL ELISA Kit

BOC-L-丙氨酸  Boc-L-alanine  质量规格：>98%,BR 人激肽释放酶1(KLK 1)试剂盒 Human Kallikrein 1,KLK 1 ELISA Kit

BOC-L-苯丙氨酸  Boc-L-phenylalanine  质量规格：>98.5%,BR 人激肽释放酶10(KLK 10)试剂盒 Human Kallikrein 10,KLK 10 ELISA Kit

BOC-甘氨酸  Boc-Glycine  质量规格：>98%,BR 人激肽释放酶11(KLK 11)试剂盒 Human Kallikrein 11,KLK 11 ELISA Kit

BOC-L-异亮氨酸  Boc-Ile-OH  质量规格：>98.5%,BR 人激肽释放酶2(hK 2)试剂盒 Human Kallikrein 2,hK 2 ELISA Kit

BOC-L-脯氨酸  Boc-Pro-OH  质量规格：>98.5%,BR 人激肽释放酶6(KLK 6)试剂盒 Human Kallikrein 6,KLK 6 ELISA Kit

BOC-L-色氨酸  Boc-Trp-OH  质量规格：>98.5%,BR 人激肽释放酶7(KLK 7)试剂盒 Human Kallikrein 7,KLK 7 ELISA Kit
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。