PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：非洲马瘟病毒PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Stigmasta-4,22-diene-3β,6β-diol  中文名：  分子式：C29H48O2  度：97.5%  兔超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISAKit              

Dregeoside Da1  中文名：  分子式：C42H70O15  度：%  兔内皮素-1(rabbit ET-1)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

Dehydroadynerigenin digitaloside  中文名：  分子式：C30H42O8  度：97.0%  兔纤维蛋白原降解产物(rabbit FDP)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

Cardenolide B-1  中文名：  分子式：C30H44O8  度：98.0%  兔促卵泡素(rabbit FSH)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

Drevogenin A  中文名：  分子式：C28H42O7  度：%  兔碱性成纤维生长因子(rabbit b-FGF/FGF-2)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装
Otophylloside O  1326583-08-7  中文名：  分子式：C56H84O20    兔子可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside  1808159-02-5  中文名：  分子式：C56H84O20    Human cardiac anscription factor GATA4 ELISA Kit 人心肌转录因子GATA4 ELISA试剂盒

Otophylloside F  250217-73-3  中文名：青阳参苷F  分子式：C48H76O16    Humanai-Ku-aibodyELISAKit 人抗Ku抗体(ai-Ku-Ab)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  171422-85-8  中文名：  分子式：C56H90O19    HumanElastaseELISA试剂盒人弹性蛋白酶(Elastase)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside  168001-54-5  中文名：  分子式：C56H90O19    组织PDK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
非洲马瘟病毒PCR检测试剂盒说明书化胆,从牛脂来(>98.0%(T))  Cholesteryl Bromide from Beef Fat  质量规格：>98.0%(T) 大鼠内脂素/内脏脂肪素(visfatin)ELISA检测试剂盒RatvisfatinELISAKit 96T/48T

胆壬酸酯(>89.0%(GC))  Cholesterol Pelargonate  质量规格：>89.0%(GC) 人白介素13(IL-13)试剂盒 Human Ierleukin 13 ELISA KIT

胆壬基碳酸酯  Cholesterol Nonyl Carbonate  质量规格： 英文名称MouseFree-T4ELISAKit小鼠游离甲状腺素(Free-T4)规格：96T/48T

胆庚基碳酸酯  Cholesterol Heptyl Carbonate  质量规格： PICOGREEN细胞繁殖定量检测试剂盒50

胆油醇碳酸酯(>70.0%(HPLC))  Cholesterol Oleyl Carbonate  质量规格：>70.0%(HPLC) Rabbit6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISA试剂盒兔6同素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA试剂盒规格：96T/48T

胆甲基碳酸酯(>80.0%(GC))  Cholesterol Methyl Carbonate  质量规格：>80.0%(GC) 小鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA 试剂盒

胆乙基碳酸酯(>94.0%(GC))  Cholesterol Ethyl Carbonate  质量规格：>94.0%(GC) Tacrolimus (FK506) ELISA Kit 人他克莫司(FK506)ELISA试剂盒

胆异丙基碳酸酯(>95.0%(GC))  Cholesterol Isopropyl Carbonate  质量规格：>95.0%(GC) HumanHerpessimplexvirus,HSV-Ag1ELISAKit 人单病毒抗原-1(HSV-Ag1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

胆丁基碳酸酯  Cholesterol Butyl Carbonate  质量规格： HumanArgyrophilicnucleolarorganizerregionproteins,Ag-NORsELISA试剂盒人核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)ELISA试剂盒规格：96T/48T

胆异丁基碳酸酯  Cholesterol Isobutyl Carbonate  质量规格： 植物源性食品芥麦(Buckwheat)试剂盒20
DBD-ED [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(2-氨基乙基氨基)-2,1,3-苯并恶二唑]  DBD-ED [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(2-aminoethylamino)-2,1,3-benzoxadiazole]   质量规格：用于高效液相色谱标记 人八聚体转录因子(OTF2A)ELISA检测试剂盒Humanoctameranscriptionfactor2A,OTF2AELISAKit 96T/48T

AABD-SH (=4-乙酰氨基-7-巯基-2,1,3-苯并恶二唑](>94.0%(HPLC))  AABD-SH (=4-Acetamido-7-mercapto-2,1,3-benzoxadiazole)   质量规格：>94.0%(HPLC) 人八聚体转录因子(OTF2A)试剂盒 Human octamer anscription factor 2A,OTF2A ELISA Kit

9-(甲基)丫啶(>98.0%(HPLC)(T))  9-(Bromomethyl)acridine   质量规格：>98.0%(HPLC)(T) 人八聚体转录因子(OTF2B)ELISA检测试剂盒Humanoctameranscriptionfactor2B,OTF2BELISAKit 96T/48T

DBD-COCl [=4-(N,N-二甲基氨磺酰)-7-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-2,1,3-苯并恶二唑](>98.0%(T))  DBD-COCl [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(N-chloroformylmethyl-N-methylamino)-2,1,3-benzoxadiazole]  质量规格：>98.0%(T) 人八聚体转录因子(OTF2B)试剂盒 Human octamer anscription factor 2B,OTF2B ELISA Kit

NBD-COCl [=4-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑](>92.0%(T))  NBD-COCl [=4-(N-Chloroformylmethyl-N-methylamino)-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole]   质量规格：>92.0%(T) 人白喉抗体(Diphtheria Ab)试剂盒 Human Diphtheria aibody ELISA Kit

邻苯二甲醛(>99.0%(GC))  o-Phthalaldehyde   质量规格：>99.0%(GC) 人白介素10(IL-10)试剂盒 Human IL-10 ELISA KIT

丹磺(>95.0%(HPLC)(T))  Dansyl Hydrazine  质量规格：>95.0%(HPLC)(T) 人白介素11(IL-11)试剂盒 Human Ierleukin 11 ELISA KIT

DBD-H [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-肼基-2,1,3-苯并恶二唑(>98.0%(HPLC))  DBD-H [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-hydrazino-2,1,3-benzoxadiazole]   质量规格：>98.0%(HPLC) 人白介素12(IL-12/P40)试剂盒 Human IL-12/P40 ELISA KIT

NBD-H (=4-肼基-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑肼)(>98.0%(HPLC))  NBD-H (=4-Hydrazino-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole Hydrazine)   质量规格：>98.0%(HPLC) 人白介素12(IL-12/P70)试剂盒 Human Ierleukin 12,IL-12/P70 ELISA KIT

1,3-环己二酮(>98.0%(GC)(T))  1,3-Cyclohexanedione  质量规格：>98.0%(GC)(T) 人白介素-12受体(IL-12R)试剂盒 Human Ierleukin 12 receptor,IL-12R ELISA kit
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。