PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：鹅裂口线虫PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Sulfamonomethoxine   38006-08-5  中文名：磺胺间甲氧嘧啶钠  分子式：C11H11N4NaO3S  度：98.0%      小鼠溶菌酶(LZM)ELISAKit              

Sulfamonomethoxine  1220-83-3  中文名：磺胺间甲氧嘧啶  分子式：C11H12N4O3S  度：98.0%      小鼠样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)ELISA试剂盒  

Sulfamethoxazole  723-46-6  中文名：磺胺甲噁唑  分子式：C10H11N3O3S  度：98.0%  关键词：    小鼠样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒  

Sulfamethazine  57-68-1  中文名：磺胺二甲嘧啶  分子式：C12H14N4O2S  度：99.0%      小鼠样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒  

Sulfaguanidine  57-67-0  中文名：磺胺脒  分子式：C7H10N4O2S  度：99.0%      小鼠样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒
4-Hydroxysapriparaquinone  120278-25-3  中文名：  分子式：C20H26O4    兔子内皮素1(ET-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Phyllostine  27270-89-9  中文名：  分子式：C7H6O4    Rat thrombospondin / thrombin sensitive protein 1 (TSP-1) ELISA Kit 大鼠血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA试剂盒

2-Methoxystypandrone  85122-21-0  中文名：  分子式：C14H12O5    Humanimmunoglobulinheavychainvariableregion,IgHVELISAKit 人球蛋白重链可变区(IgHV)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Lapachol  84-79-7  中文名：拉帕醇  分子式：    HumandysophinELISA试剂盒人肌养蛋白(dysophin)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Deoxylapachol  3568-90-9  中文名：  分子式：C15H14O2    组织P38β2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
鹅裂口线虫PCR检测试剂盒说明书三亚苯(>96.0%(GC))  Triphenylene  质量规格：>96.0%(GC) 人脂肪酸结合蛋白(FABP)ELISA检测试剂盒Humanfattyacid-bindingprotein,FABPELISAKit 96T/48T

内消旋-四苯基卟吩(>92.0%(HPLC))  meso-Tetraphenylchlorin  质量规格：>92.0%(HPLC) 大鼠前白蛋白(PA)试剂盒 Rat prealbumin,PA ELISA Kit

四苯基卟吩(不含氯)(>98.0%(HPLC))  Tetraphenylporphyrin (Chlorin free)  质量规格：>98.0%(HPLC) 英文名称RatargininevasopressinELISAKIT大鼠精氨酸加压素规格：96T/48T

2,4,6-三苯基-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))  2,4,6-Triphenyl-1,3,5-triazine  质量规格：>98.0%(GC) 酵母DNA损伤彗星荧光检测试剂盒20

1,3-二苯基-1,3-丙二酮(>98.0%(GC))  1,3-Diphenyl-1,3-propanedione  质量规格：>98.0%(GC) ELISAKitMAP-2人微管相关蛋白2规格：48T/96T

2,6-二甲基-3,5-庚二酮(>97.0%(GC))  2,6-Dimethyl-3,5-heptanedione  质量规格：>97.0%(GC) 小鼠多巴胺受体D3(DRD3)ELISA试剂盒 ，英文名： DRD3 ELISA Kit

9H,9H-三十氟-8,10-十七烷二酮(>98.0%(GC))  9H,9H-Triacontafluoro-8,10-heptadecanedione  质量规格：>98.0%(GC) 人热休克蛋白27(HSP-27)ELISA检测试剂盒Humanheatshockprotein27,HSP-27ELISAKit 96T/48T

9-菲(>98.0%(GC))  9-Bromophenanthrene  质量规格：>98.0%(GC) 大鼠葡萄糖转运蛋白4(GL4)试剂盒 Rat glucose anspoer 4,GL4 ELISA Kit

3-菲(>98.0%(GC))  3-Bromophenanthrene  质量规格：>98.0%(GC) 英文名称RatHaptoglobinELISAKIT大鼠结合珠蛋白(Hpt)规格：96T/48T

3,6-二甲基菲(>95.0%(GC))  3,6-Dimethylphenanthrene  质量规格：>95.0%(GC) 酵母F型ATP酶(FtypeATPase)活性比色法定量检测试剂盒20
D-半胱氨酸盐酸盐一水  D-Cysteine hydrochloride monohydrate  质量规格：度大于98%,BR，一水物 人谷胱甘肽(GSH)试剂盒 Human glathione,GSH ELISA Kit

钙蛋白酶抑制剂II(进口)  Calpain Inhibitor II(ALLM)  质量规格：≥95%,美国进口 人谷胱甘肽S转移酶(GSTs)ELISA检测试剂盒HumanglathioneS-ansferases,GSTsELISAKit 96T/48T

炔孕酮/素(标准品)  Ethisterone  质量规格：>98%,标准品 人谷胱甘肽S转移酶TT(GSTπ)试剂盒 Human Glathione S-ansferase TT,GSTπ ELISA Kit

炔孕酮/素  Ethisterone  质量规格：>98% 人谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)试剂盒 Human GSH-Px ELISA Kit

D-胱氨酸  D-Cystine  质量规格：0.98 人谷胱甘肽还原酶(GR)试剂盒 Human Glathione Reductase,GR ELISA Kit

DL-色氨酸  DL-Tryptophan  质量规格：>98%,BR 人谷胱甘肽硫转移酶pi基因(GSTpi)ELISA检测试剂盒HumanglathioneS-ansferases,GSTpiELISAKit 96T/48T

DL-丝氨酸  DL-Serine  质量规格：>98%,可用于细胞培养 人谷胱甘肽硫转移酶pi基因(GSTpi)试剂盒 Human glathione S-ansferases,GSTpi ELISA Kit

L-蛋氨酸;甲硫氨酸  L-Mine  质量规格：>98%,BR 人骨保护素(OPG)试剂盒 Human Osteoprotegerin,OPG ELISA KIT

DL-苯丙氨酸  DL-Phenylalanine  质量规格：>98,BR 人骨成型蛋白15(BMP-15/GDF-9B)试剂盒 Human BMP-15 ELISA kit

DL-天冬酰胺，一水  DL-Asparagine monohydrate  质量规格：>99% 人骨成型蛋白2(BMP-2)试剂盒 Human BMP-2 ELISA kit
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。