PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：无浆体通用PCR检测试剂盒价格使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Taxilluside A  1661914-46-0  中文名：  分子式：C18H24O10    Humancytovillin/ezrin,CVLELISA试剂盒人细胞绒毛蛋白/埃兹蛋白(CVL)ELISA试剂盒规格：96T/48T

n-Butyl β-D-fructofuranoside  80971-60-4  中文名：基-β-D-果糖苷  分子式：C10H20O6    组织INSULI激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Palmitone  502-73-8  中文名：棕榈酮  分子式：C31H62O    Humanplasminogenactivatorinhibitor1，PAI-1ELISAKit人纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

9-Oxooctadeca-10,12-dienoic acid  54232-58-5  中文名：  分子式：C18H30O3    兔子血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Acetylatractylodinol  61582-39-6  中文名：乙酰苍术素醇  分子式：C15H12O3    Rat angiopoietin receptor Tie2 (ANG-R-Tie2) ELISA Kit 大鼠生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA试剂盒
Rhein  478-43-3  中文名：大黄酸  分子式：C15H8O6    兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

2-Methylanthraquinone  84-54-8  中文名：2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O2    Human adenosine three phosphate binding cassette anspoer A1 (ABCA1) ELISA Kit 人腺苷三0酸结合盒转运体A1(ABCA1)ELISA试剂盒

1-Hydroxy-2-methylanthraquinone  6268/9/3  中文名：1-羟基-2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O3    Humanypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit 人胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Anthraglycoside B  23313-21-5  中文名：大黄素-8-O-葡萄糖苷  分子式：C21H20O10    HumanDopamineD1receptor,D1RELISA试剂盒人多巴胺D1受体(D1R)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Torososide A  165689-32-7  中文名：  分子式：C38H32O15    组织NAD依赖性甘油-3-0酸脱氢酶(NAD-Glyceraldehyde-3-PhosphateDehydrogenase;NAD-GAPDH)活性光谱法定量检测试剂盒20次
无浆体通用PCR检测试剂盒价格5,10-二氢-5,10-二甲基吩嗪(>98.0%(GC)(N))  5,10-Dihydro-5,10-dimethylphenazine  质量规格：>98.0%(GC)(N) 人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA检测试剂盒HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISAKit 96T/48T

双(羰基二硫代)四硫富瓦烯(>95.0%(W))  Bis(carbonyldithio)tetrathiafulvalene  质量规格：>95.0%(W) 大鼠素E2(PGE2)试剂盒 Rat Prostaglandin E2,PGE2 ELISA Kit

1,2-苯二硫醇(>95.0%(GC))  1,2-Benzenedithiol  质量规格：>95.0%(GC) 英文名称RatTG-AbELISAKit大鼠抗甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)ELISA试剂盒规格：96T/48T

4,5-双(甲硫代)-1,3-二硫醇-2-酮(>98.0%(GC))  4,5-Bis(methylthio)-1,3-dithiol-2-one  质量规格：>98.0%(GC) 胶原酶潜酶活化剂(APMA)500微升

二巯基马来腈二钠(>90.0%(N))  Di Dimercaptomaleonitrile  质量规格：>90.0%(N) ELISAKitVD人维生素D规格：48T/96T

4,5-亚乙基二硫代-1,3-二硫醇-2-硫酮(>98.0%(GC))  4,5-Ethylenedithio-1,3-dithiole-2-thione  质量规格：>98.0%(GC) 小鼠多萜长醇二0酸寡糖蛋白环糊精糖基转移酶(DDOST/OST-48)ELISA试剂盒 ，英文名： DDOST/OST-48 ELISA Kit

4,5-乙撑二硫代-1,3-二硫酚-2-酮(>98.0%(GC))  4,5-Ethylenedithio-1,3-dithiol-2-one  质量规格：>98.0%(GC) 大鼠Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA检测试剂盒RatCollageypeⅣ,ColⅣELISAKIT 96T/48T

4,5-甲二硫基-1,3-二硫醇-2-酮(>95.0%(HPLC))  4,5-Methylenedithio-1,3-dithiol-2-one  质量规格：>95.0%(HPLC) 人白介素1β前体(pro-IL1B)试剂盒 Human pro ierleukin 1 beta,pro-IL1B ELISA Kit

3,3'-Bithienyl(>98.0%(GC))  3,3'-Bithiophene  质量规格：>98.0%(GC) 英文名称MouseLaminaPropriaLymphocyteELISAKit小鼠脂蛋白脂酶(LPL)规格：96T/48T

2,1,3-苯并噻二唑(>99.0%(GC))  2,1,3-Benzothiadiazole  质量规格：>99.0%(GC) PH4-5显色(BROMOCRESOLGREEN)指示溶液50毫升
D-酪氨酸  D-Tyrosine  质量规格：>98%,BR 人干细胞因子受体(SCFR)试剂盒 Human Stem Cell Factor Receptor,SCFR ELISA kit

D-组氨酸  D-Histidine  质量规格：>98%,BR 人刚地弓形虫(T.gondii)试剂盒 Human Toxoplasma Gondii,T.gondii ELISA Kit

D-丙氨酸甲酯盐酸盐  D-Alanine Methyl Ester Hydrochloride  质量规格：0.98 人高半胱氨酸(Hcy)试剂盒 Human Homocysteine,HCY ELISA Kit

D-丙氨酸叔丁酯盐酸盐  D-Alanine tert-Butyl Ester Hydrochloride  质量规格：0.99 人高尔基蛋白73(GP-73)试剂盒 Human GP-73 ELISA Kit

D-精氨酸  D-Arginine  质量规格：0.98 人高尔基体抗体(AGAA)试剂盒 Human ai-golgi apparatus aibody,AGAA ELISA Kit

非对称二甲基精氨酸  ADMA  质量规格：>98%,盐酸盐形式，美国进口 人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)ELISA检测试剂盒HumancytokeratinHighMolecularWeight,CK-HMWELISAKit 96T/48T

N'-硝基-D-精氨酸  N'-Nitro-D-arginine   质量规格：0.98 人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)试剂盒 Human cytokeratin High Molecular Weight,CK-HMW ELISA Kit

D-天冬酰胺，一水  D-Asparagine monohydrate  质量规格：0.99 人高分子量脂联素(HMW Adiponectin)试剂盒 Human High Molecular Weight Adiponectin,HMW Adiponectin ELISA Kit

D-天冬氨酸  D-Aspartic acid   质量规格：0.98 人高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)试剂盒 human ulasensitive thyroid-stimulating hormone,U-TSH ELISA Kit

D-天冬氨酸4-叔丁酯  D-Aspartic acid 4-tert-butyl ester  质量规格：0.98 人(HDL)ELISA检测试剂盒HumanHighdensitylipoprotein,HDLELISAKit 96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。