PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：马隐秘杆菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Tenacigenin B  中文名：  分子式：C21H32O5  度：%  兔内啡肽-b(rabbit Endorphin-b)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

Uzarigenin  中文名：  分子式：C23H34O4  度：97.5%  兔雌二醇(rabbi E2)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

Odoroside H  中文名：  分子式：C30H46O8  度：98.5%  兔上腺素(rabbit EPI)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  

Neridienone B  中文名：  分子式：C21H28O4  度：95.0%  兔内皮型合成酶elisa试剂盒   兔内皮型合成酶试剂盒   规格型号：96T/48T   兔内皮型合成酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔内皮型合成酶试剂盒、兔内皮型合成酶elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Neritaloside  中文名：  分子式：C32H48O10  度：97.5%  兔基质金属蛋白酶1elisa试剂盒   兔基质金属蛋白酶1试剂盒   规格型号：96T/48T   兔基质金属蛋白酶1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔基质金属蛋白酶1试剂盒、兔基质金属蛋白酶1elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
Cerebroside B  88642-46-0  中文名：脑苷酯B  分子式：C41H77NO9    兔子素E1(PGE1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

4-Oxododecanedioic acid  30828-09-2  中文名：  分子式：C12H20O5    Human adenovirus IgG (ADV-IgG) ELISA Kit 人腺病毒IgG(ADV-IgG)ELISA试剂盒

Rengynic acid  517883-38-4  中文名：  分子式：C8H14O4    HumanKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit 人肾损伤分子1(Kim-1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Epirengynic acid  1310146-00-9  中文名：  分子式：C8H14O4    HumanDihydrotestosterone,DHTELISA试剂盒人双氢睾同(DHT)ELISA试剂盒规格：96T/48T

4-Hydroxy-4-(methoxycarbonylmethyl)cyclohexanone  81053-14-7  中文名：  分子式：C9H14O4    组织NADPH细胞色素C还原酶(NADPHCytochromeCReductase)活性比色法定量检测试剂盒20次
马隐秘杆菌PCR检测试剂盒说明书结晶玫瑰(>98%,BR)  α-(Trichloromethyl)benzyl acetate  质量规格：>98%,BR 人胃泌素释放多肽(GRP)ELISA检测试剂盒Humangasin-reliasingpeptide,GRPELISAKit 96T/48T

三甲基乙酸(>99%,BR)  Trimethylacetic acid  质量规格：>99%,BR 大鼠素F2α(PGF2α)试剂盒 Rat Prostaglandin F2α,PGF2α ELISA Kit

转染试剂（溶液）  Transfection Reagents-Biofection  质量规格：>95%，分子生物学级 英文名称Rattarate-resistaacidphosphataseorm5bELISAKit大鼠抗酸性0酸酶5b(ACP5b)规格：96T/48T

反式肉桂醛(>95%，BR)  trans-Cinnamaldehyde  质量规格：>95%，BR 简单细菌结晶紫染色试剂盒50

富勒烯 C60()，巴克球 C60  Fullerene C60 (pure)  质量规格：>99.5%(HPLC) ELISAKitVDR人维生素D受体规格：48T/96T

富勒烯提取物,C60(含约20%的C70)，巴克球提取物  ullerene Extract, C60 (contains ca. 20% C70)  质量规格：>70.0%(HPLC) 小鼠二0酸腺苷(ADP)ELISA 试剂盒

富勒烯 C60，巴克球 C60  Fullerene C60  质量规格：>99.0%(HPLC) Rat endostatin (ES) ELISA Kit 大鼠内皮抑素(ES)ELISA试剂盒

富勒烯 C70，巴克球 C70  Fullerene C70  质量规格：>98.0%(HPLC) HumanactivatedcoagulationfactorⅫ,FⅫaELISAKit 人活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

C60MC12  C60MC12  质量规格：>97.0%(HPLC) Humanapoptosissignalregulatingkinase1,ASK-1ELISA试剂盒人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

单壁碳纳米管(>55%) 小于2nm(直径),5-15μm(长度)  Carbon Nanotube Single-walled (>55%) below 2nm(diam.), 5-15μm(length)  质量规格： 植物乙醇酸氧化酶(glycolateoxidase)活性比色法定量检测试剂盒20
E-64d,蛋白酶抑制剂,阿洛司他丁  E64d,E-64d  质量规格：>98%,BR 人(DF)抗体(IgG)试剂盒 Human DF IgG ELISA kit

2’-脱氧胞苷-5‘-二钠盐  dCMP,2Na  质量规格：>98%，BR 人抗体(DF-Ab)试剂盒 Human dengue fever aibody,DF-Ab ELISA Kit

dAMP;2’-脱氧腺苷-5‘-单  2'-Deoxyadenosine 5'-monophosphate  质量规格：>99%,BR 人抗体IgM(DF-Ab IgM)试剂盒 Human dengue fever aibody IgM,DF-Ab IgM ELISA kit

黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐  FAD-Na2  质量规格：BR,罗氏进分 人低分子量细胞角蛋白(CK-LMW)ELISA检测试剂盒HumancytokeratinLowMolecularWeight,CK-LMWELISAKit 96T/48T

GTP;鸟苷-5‘-三钠盐  GTP, 3 Salt  质量规格：>90%,分子生物学级 人低分子质量蛋白7/β型蛋白酶体9(LMP7/PSMB9)ELISA检测试剂盒Humanlowmolecular-weightprotein/proteasomebeta-typesubunit,LMP7/PSMB9ELISAKit 96T/48T

肌苷-5’-二钠盐  5-IMP，2Na  质量规格：>98%,BR 人低分子质量蛋白7/β型蛋白酶体9(LMP7/PSMB9)试剂盒 Human LMP7/PSMB9 ELISA Kit

尿苷-5’-二钠盐(UDP)  Uridine 5'-diphosphate  salt from   质量规格：>98%,BR 人(LDL)ELISA检测试剂盒Humanlowdensitylipoprotein,LDLELISAKit 96T/48T

5’-尿苷酸二钠(UMP)  5'-UMP-Na2  质量规格：>99%,BR 人(LDL)试剂盒 Human low density lipoprotein,LDL ELISA Kit

dAMP-Na2;脱氧腺苷二钠  2-Deoxyadenosine-5-Monophosphate Di salt(dAMP-Na2)  质量规格：>98,BR 人复合物(LDL-IC)试剂盒 Human LDL-IC ELISA Kit

ATP.Na2; 腺苷-5’-三二钠盐水合物  5'-ATP-Na2  质量规格：>98%,BR,可用于细胞培养,三水合物 人受体(LDLR)ELISA检测试剂盒Humanlowdensitylipoproteieceptor,LDLRELISAKit 96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。