PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：禽致病性大肠杆菌1血清型PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Tropicamide  1508-75-4  中文名：托吡卡胺  分子式：C17H20N2O2  度：98.0%  关键词：    小鼠孕受体elisa试剂盒   小鼠孕受体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠孕受体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠孕受体试剂盒、小鼠孕受体elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Trityl candesartan cilexetil  170791-09-0  中文名：  分子式：C52H48N6O6  度：98.0%  关键词：    小鼠孕激素elisa试剂盒   小鼠孕激素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠孕激素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠孕激素试剂盒、小鼠孕激素elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Trityl candesartan  139481-72-4  中文名：  分子式：C43H34N6O3  度：98.0%  关键词：    小鼠诱导型NO合酶elisa试剂盒   小鼠诱导型NO合酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠诱导型NO合酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠诱导型NO合酶试剂盒、小鼠诱导型NO合酶elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Triptoquinone A  142950-86-5  中文名：  分子式：C20H24O4  度：%  关键词：    小鼠游离状腺原酸elisa试剂盒   小鼠游离状腺原酸试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠游离状腺原酸试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠游离状腺原酸试剂盒、小鼠游离状腺原酸elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  

Trimethoprim  738-70-5  中文名：甲氧苄啶  分子式：C14H18N4O3  度：98.0%  关键词：    小鼠孕受体(PROGR)ELISAkit
6-Amino-1,3-dimethyluracil  6642-31-5  中文名：  分子式：C6H9N3O2    Humancytokeratin20,CK20ELISA试剂盒人细胞角蛋白20(CK20)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Metoclopramide  364-62-5  中文名：甲氧氯普胺  分子式：C14H22ClN3O2    组织HSV(HERPESSIMPLX)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次

Amiodarone hydrochloride  19774-82-4  中文名：盐酸胺酮  分子式：C25H30ClI2NO3    HumanplateletmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISAKit人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Zidovudine  30516-87-1  中文名：齐多夫定  分子式：C10H13N5O4    兔子中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Lamivudine  134678-17-4  中文名：拉米夫定  分子式：3O3S    Human cyclin D3 (Cyclin-D3) ELISA Kit 人细胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA试剂盒
禽致病性大肠杆菌1血清型PCR检测试剂盒直销金胺O（标准品）  AURAMINE O   质量规格：检查 大鼠胰岛细胞抗体(ICA)ELISA检测试剂盒Ratisletcellaibody,ICAELISAKit 96T/48T

胭脂红（标准品）  Carmine  质量规格：检查 人白介素28A(IL-28A/IFN-λ2)试剂盒 Human Ierleukin 28A,IL-28A/IFN-λ2 ELISA kit

赤藓红（标准品）  Acid Red 51  质量规格：检查 英文名称MouseHLA-2ELISAKit小鼠组织相容性抗原(HLA-2)规格：96T/48T

酸性红 73（标准品）  Acid Red 73  质量规格：检查 pCAMBIA+目的基因植物表达

（标准品）  Lauric acid  质量规格：含量测定 PorcineProgesterone,PROGELISA试剂盒猪孕激素/孕同(PROG)ELISA试剂盒规格：96T/48T

7,4'-二羟基黄酮（标准品）  7,4'-DIHYDROXYFLAVONE  质量规格：供含量测定用 小鼠钙调素(CAM)ELISA试剂盒 ，英文名： CAM ELISA Kit

千金子素L1（标准品）  Euphorbiasteroid  质量规格：供含量测定用 大鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA检测试剂盒RatAi-ypsin,ATELISAKit 96T/48T

异型南五味子丁素（标准品）  heteroclitin D  质量规格：含量测定 人白介素26(IL-26)试剂盒 Human Ierleukin 26,IL-26 ELISA Kit

紫苏醛（标准品）  (-)-PERILLALDEHYDE  质量规格：含量测定 英文名称MouseHLA-1ELISAKit小鼠组织相容性抗原(HLA-1)规格：96T/48T

相思子碱（标准品）  L-ABRINE  质量规格：供鉴别用 pcDNA3.1+目的基因真核表达
N-羟乙酰神经氨酸  N-Glycolylneuraminic Acid  质量规格：美国进口 植物组织DNA损伤彗星荧光检测试剂盒20

N,N-二去甲基盐酸曲美布汀-d5  N,N-Didesmethyl Trimebutine-d5 Hydrochloride  质量规格：美国进口 植物组织可溶性总蛋白制备试剂盒20

N,N-二去甲基盐酸曲美布汀  N,N-Didesmethyl Trimebutine Hydrochloride  质量规格：美国进口 植物组织膜性囊泡(vacuole)分离试剂盒20

N-去甲基盐酸曲美布汀  N-Demethyl Trimebutine Hydrochloride  质量规格：美国进口 植物组织线粒体超氧化物歧化酶(Mn/FeSOD)分离试剂盒50

柚皮素-4'-O-β-D-葡萄糖苷酸  Naringenin-4'-O-beta-D-Glucuronide  质量规格：美国进口 植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒20

(±)-柚皮素  (±)-Naringenin  质量规格：美国进口 植物组织质膜(plasmamembrane)分离试剂盒20

3-羟基环苯扎林  3-Hydroxy Cyclobenzaprine  质量规格：美国进口 质粒/蛋白制备样品内比色法定量检测试剂盒20

环苯扎林 N-β-D-葡萄糖苷酸  Cyclobenzaprine N-β-D-Glucuronide  质量规格：美国进口 相关凋亡诱导配体3(AIL-R3)ELISA检测试剂盒Monkeytumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AIL-R3ELISAKit 96T/48T

去甲基盐酸环苯扎林  Desmethyl Cyclobenzaprine Hydrochloride  质量规格：美国进口 猪Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢ)ELISA检测试剂盒PorcineprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit 96T/48T

δ9(11)-甲基睾酮  Delta9(11)-Methyltestosterone  质量规格：美国进口 猪α干扰素(IFN-α)ELISA检测试剂盒PorcineIerferonα,IFN-αELISAKit 96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。