PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：副鸡禽杆菌PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Withaperuvin C  81644-34-0  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  关键词：  酸浆属; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠正常T细胞表达和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA试剂盒  

Withanolide S  63139-16-2  中文名：醉茄内酯S  分子式：C28H40O8  度：98.0%  关键词：  南非醉茄; 睡茄交酯; 睡茄内酯; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA试剂盒  

Withanolide C  108030-78-0  中文名：醉茄内酯C  分子式：C28H39ClO7  度：97.5%  关键词：  细胞毒活性; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠载脂蛋白H(Apo-H)ELISA试剂盒  

Wallicoside  88797-59-5  中文名：断节参苷  分子式：C61H98O26  度：98.0%  关键词：    小鼠载脂蛋白E(Apo-E)ELISA试剂盒           

Vildagliptin  274901-16-5  中文名：维达列汀  分子式：C17H25N3O2  度：98.0%  关键词：    小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISAKit
5-Aminosalicylic acid  89-57-6  中文名：5-氨基水杨酸  分子式：C7H7NO3    CLIAKitforATA(HumanAngiotensinaseA)ELISAKit人紧张肽酶A规格：48T/96T

Norfloxacin  70458-96-7  中文名：诺氟沙星  分子式：C16H18FN3O3    线粒体复合物V蛋白共沉淀分析试剂盒5次

Indapamide  26807-65-8  中文名：吲达帕胺  分子式：C16H16ClN3O3S    Rabbitadramycin,ADRELISAKit兔阿霉素(ADR)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Loperamide hydrochloride  34552-83-5  中文名：盐酸洛哌丁胺  分子式：C29H34Cl2N2O2    豚鼠Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6)ELISA试剂盒 ，英文名： KL-6 ELISA Kit

Nefopam hydrochloride  23327-57-3  中文名：盐酸奈福泮  分子式：C17H20ClNO    Human pulmonary surfacta associated protein A (SP-A) ELISA Kit 人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒
副鸡禽杆菌PCR检测试剂盒直销蒙脱石（标准品）  Montmorillonit  质量规格：鉴别 人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)ELISA检测试剂盒Humancholecystokininoctapeptide,CCK-8ELISAKit 96T/48T

佛手柑素;香柠檬素;佛手柑亭;香柠檬亭（标准品）  Bergamottin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠神经生长因子(NGF)试剂盒 Rat Nerve growth factor,NGF ELISA kit

盐酸罗哌卡因（标准品）  Ropivacaine hydrochloride   质量规格：HPLC法含量测定 英文名称RatCoisolELISAKit大鼠皮质醇(Coisol)ELISAKit规格：96T/48T

番石榴苷（标准品）  Guaijaverin  质量规格：HPLC≥98%,标准品 活体细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒20

恩曲他滨（标准品）  Emtricitabine  质量规格：HPLC>99%,标准品 ELISAKitPlg人纤溶酶原规格：48T/96T

恩曲他滨  Emtricitabine  质量规格：>99%,核苷逆转录酶(NRTI)抑制剂 小鼠肝素蛋白聚糖2(HSPG2)ELISA试剂盒 ，英文名： HSPG2 ELISA Kit

肌酐（标准品）  Creatinine  质量规格：供检查用 人神经降压素()ELISA检测试剂盒HumanNeurotensin,ELISAKit 96T/48T

双氯芬酸钾（标准品）  Diclofenac Potassium  质量规格：含量测定 大鼠血红蛋白(HbCO)试剂盒 Rat Carboxyhemoglobin,HbCO ELISA Kit

依西美坦（标准品）  Exemestane  质量规格：含量测定 英文名称MMP-1金属基质蛋白酶-1规格：96T/48T

盐酸曲美他嗪（标准品）  Trimetazidine Hydrochloride  质量规格：含量测定 副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20
N-乙酰磺胺甲恶唑  N-Acetyl Sulfamethoxazole  质量规格：美国进口 英文名称RatAngiogeninELISAKit大鼠生长素(Angiogenin)规格：96T/48T

磺胺甲恶唑 β-D-葡萄糖苷酸  Sulfamethoxazole β-D-Glucuronide  质量规格：美国进口 英文名称RatAngiopoietin-2ELISAKit大鼠生成素-2(ANG-2)规格：96T/48T

头孢匹罗  Cefpirome  质量规格：美国进口 英文名称RatAngiopoietin-2ELISAKit大鼠生成素-2(ANG-2)规格：96T/48T

阿米舒必利-d5  Amisulpride-d5  质量规格：美国进口 英文名称RatangiotensinogenELISAKit大鼠紧张素原(aGT)规格：96T/48T

美罗培南碳酸钠  Meropenem with  carbonate  质量规格：美国进口 英文名称RatangiotensinogenELISAKit大鼠紧张素原(aGT)规格：96T/48T

美罗培南钠盐  Meropenem  Salt  质量规格：美国进口 英文名称RatangiotensionIELISAKit大鼠紧张素I(AngI)规格：96T/48T

6,8-二甲氧基莫西沙星盐酸盐  6,8-Dimethoxy Moxifloxacin Hydrochloride  质量规格：美国进口 英文名称RatangiotensionIELISAKit大鼠紧张素I(AngI)规格：96T/48T

8-乙氧基莫西沙星  8-Ethoxy Moxifloxacin  质量规格：美国进口 英文名称RatansferrieceptorELISAKit大鼠转铁蛋白受体(TFR)规格：96T/48T

8-去甲氧基-8-氟莫西沙星  8-Desmethoxy-8-fluoro Moxifloxacin  质量规格：美国进口 英文名称RatansferrieceptorELISAKit大鼠转铁蛋白受体(TFR)规格：96T/48T

外消旋顺式-莫西沙星酰基-β-D-葡萄糖苷酸  rac cis-Moxifloxacin Acyl-β-D-glucuronide  质量规格：美国进口 英文名称RatAquaporin0ELISAKit大鼠水通道蛋白0(AQP0)规格：96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。