PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：巴贝斯属虫通用PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

α-Spinasterol  481-18-5  中文名：α-菠甾醇  分子式：C29H48O  度：97.0%  关键词：  ; 栝楼; 豆甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠抗线粒体抗体(mouse AMA)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

α-Lipoic acid  1077-28-7  中文名：α-硫辛酸  分子式：C8H14O2S2  度：98.5%  关键词：  植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠抗核抗体(mouse ANA)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

α-Lapachone  4707-33-9  中文名：  分子式：C15H14O3  度：98.0%  关键词：  萘醌; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠紧张素II(mouse ANG II)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  

α-D-Glucose  492-62-6  中文名：α-D-葡萄糖  分子式：C6H12O6  度：98.0%  关键词：    小鼠脂肪酸合成酶   英文名称：   Mouse Fatty Acid Syhase   规格：   48T/96T   英文缩写：   FAS

    中文名：佐匹克隆  分子式：C17H17ClN6O3  度：98.0%  关键词：    小鼠促卵泡生成激素   英文名称：   Mouse Follicle Stimulating Hormone   规格：   48T/96T   英文缩写：   FSH
2-Methyl-4-(2-methylbenzoylamino)benzoic acid  317374-08-6  中文名：  分子式：C16H15NO3    CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/MELISAKit大鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M规格：48T/96T

7-Chloro-1,2,3,4-tetrahydrobenzo[b]azepin-5-one  160129-45-3  中文名：  分子式：C10H10ClNO    细菌营养琼脂平板50个

Nicorandil  65141-46-0  中文名：尼可地尔  分子式：C8H9N3O4    RabbitEpidermalgrowthfactor,EGFELISAKit兔子表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Dronedarone hydrochloride  141625-93-6  中文名：盐酸决奈达隆  分子式：C31H45ClN2O5S    豚鼠白介素10(IL10)ELISA试剂盒 ，英文名： IL10 ELISA Kit

Bisoprolol fumarate  104344-23-2  中文名：富马酸比索洛尔  分子式：C22H35NO8    Human mannose receptor (MR) ELISA Kit 人甘露糖受体(MR)ELISA试剂盒
巴贝斯属虫通用PCR检测试剂盒直销5-氨基水杨酸,美沙拉秦  5-Aminosalicylic acid  质量规格：>98%,BR 人β2糖蛋白(β2-GP)ELISA检测试剂盒Humanbeta2glycoprotein,β2-GPELISAKit 96T/48T

盐酸喹那普利（标准品）  Quinapril hydrochloride  质量规格：HPLC法含量测定 大鼠蛋白(nephrin)试剂盒 Rat Nephrin ELISA Kit

爱普列特（标准品）  Epristeride  质量规格：UV法含量测定 英文名称RatPSAELISAKit大鼠特异性抗原(PSA)规格：96T/48T

羟苯磺酸钙（标准品）  Calcium dobesilate  质量规格：含量测定 活体细胞半胱氨酸蛋白酶-2(CASPASE-2)活性原位荧光染色检测试剂盒20

异鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷（标准品）  Isorhamnetin 3-glucoside-7-rhamnoside  质量规格：HPLC≥95%,标准品 ELISAKitABCA1人腺苷三0酸结合盒转运体A1规格：48T/96T

西吡氯铵（标准品）  Cetylpyridinium chloride  质量规格：含量测定 小鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒 ，英文名： SCF/MGF ELISA Kit

硫酸羟氯喹（标准品）  Hydroxychloroquine sulfate  质量规格：UV法溶出度检查 大鼠叶酸(FA)ELISA检测试剂盒RatFolicacid,FAELISAKit 96T/48T

车叶草苷（标准品）  Asperuloside  质量规格：HPLC≥98%，标准品 人白介素35(IL-35)试剂盒 Human Ierleukin 35,IL-35 ELISA Kit

Galeterone (TOK001)  TOK-001  质量规格：>98%,CYP17抑制剂 Wheatgermagglinin,WGAELISAKit麦胚凝集素/凝集蛋白(WGA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

山柰酚-3-槐二糖-7-鼠李糖苷  Kaempferol 3-sophoroside-7-rhamnoside  质量规格：HPLC≥85%,标准品 PAR-2(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克
Prosapogenin CP6  Prosapogenin CP6  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA检测试剂盒Rabbitlymphocytefunctionassociatedaigen3,LFA-3ELISAKit 96T/48T

Crovatin  Crovatin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔内皮型合成酶(eNOS)ELISA检测试剂盒RabbitEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 96T/48T

Croverin  Croverin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA检测试剂盒Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAkit 96T/48T

levatin  levatin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA检测试剂盒RabbitUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAkit 96T/48T

苍耳亭（标准品）   Xanthatin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA检测试剂盒Rabbitprothrombinfragme1+2,F1+2ELISAKit 96T/48T

辛辣内酯A（标准品）  Pungiolide A  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔去甲(NA)ELISA检测试剂盒RabbitNoradrenaline,NAELISAKit 96T/48T

麻枫树酚酮B（标准品）   Jatropholone B  质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔热休克蛋白20(HSP-20)ELISA检测试剂盒RabbitHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit 96T/48T

3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-醇（标准品）  3β-acetoxy-eupha- 7,25-dien-24(R)-ol   质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔热休克蛋白40(HSP-40)ELISA检测试剂盒RabbitHeatShockProtein40,HSP-40ELISAKit 96T/48T

11-羟基柳杉酚（标准品）  11-hydroxy-sugiol   质量规格：HPLC≥98%，标准品 兔热休克蛋白70(HSP-70)ELISA检测试剂盒RabbitHeatShockProtein70,HSP-70ELISAKit 96T/48T

L-乳酸(标准品)  L-(+)-Lactic acid  质量规格：≥98%,标准品 兔热休克蛋白90(HSP-90)ELISA检测试剂盒RabbitHeatShockProtein90,HSP-90ELISAKit 96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。