PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：箭毒蛙壶菌PCR检测试剂盒价格使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISAKit     Hypocrellin A  中文名：竹红菌甲素  分子式：C30H26O10 

大鼠过敏/补体片断4a(C4a)ELISAKit     Tokinolide B  中文名：  分子式：C24H28O4 

大鼠过敏/补体片断4a(C4a)ELISAKit     Tokinolide B  112966-16-2  中文名：  分子式：C24H28O4  度：96.0%  关键词： 

大鼠固(ALD)ELISAKit     Tolazoline hydrochloride  中文名：盐酸妥拉唑林  分子式：C10H13ClN2 

大鼠二氧化酶elisa试剂盒   大鼠二氧化酶试剂盒   规格型号：96T/48T   大鼠二氧化酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠二氧化酶试剂盒、大鼠二氧化酶elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Lonidamine  中文名：氯尼达明  分子式：C15H10Cl2N2O2
Tegafur  17902-23-7  中文名：替加氟  分子式：C8H9FN2O3    人真核翻译起始因子3aelisa试剂盒   人真核翻译起始因子3a试剂盒   规格型号：96T/48T   人真核翻译起始因子3a试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人真核翻译起始因子3a试剂盒、人真核翻译起始因子3a elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Sorafenib tosylate  475207-59-1  中文名：索拉非尼  分子式：C28H24ClF3N4O6S    人长效甲状腺刺激素elisa试剂盒   人长效甲状腺刺激素试剂盒   规格型号：96T/48T   人长效甲状腺刺激素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人长效甲状腺刺激素试剂盒、人长效甲状腺刺激素elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Sorafenib  284461-73-0  中文名：索拉非尼  分子式：C21H16ClF3N4O3    人粘膜相关上皮趋化因子elisa试剂盒   人粘膜相关上皮趋化因子试剂盒   规格型号：96T/48T   人粘膜相关上皮趋化因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人粘膜相关上皮趋化因子试剂盒、人粘膜相关上皮趋化因子elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Loxoprofen  68767-14-6  中文名：洛索洛芬  分子式：C15H18O3    人早老素2elisa试剂盒   人早老素2试剂盒   规格型号：96T/48T   人早老素2试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人早老素2试剂盒、人早老素2 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  

Retigabine  150812-12-7  中文名：瑞替加滨  分子式：C16H18FN3O2    人着丝粒蛋白Belisa试剂盒   人着丝粒蛋白B试剂盒   规格型号：96T/48T   人着丝粒蛋白B试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人着丝粒蛋白B试剂盒、人着丝粒蛋白B elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
箭毒蛙壶菌PCR检测试剂盒价格土大黄苷(标准品)  Rhapontin  质量规格：HPLC≥98%,标准品 ELISAKitcTn-Ⅰ人心肌肌钙蛋白Ⅰ规格：48T/96T

盐酸苯海索（标准品）  Benzhexol hydrochloride  质量规格：含量测定 小鼠谷酸脱羧酶自身抗体IgM(GAD-Ab-IgM)ELISA试剂盒 ，英文名： GAD-Ab-IgM ELISA Kit

叶酸（标准品）  Folic acid  质量规格：含量测定 大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA检测试剂盒Ratai-endothelialcellaibody,AECAELISAKit 96T/48T

葡萄糖酸钙(标准品)  Calcium gluconate  质量规格：检查 人白细胞活化黏附因子(ALCAM)试剂盒 Human ALCAM ELISA Kit

双羟萘酸噻嘧啶（标准品）  Pyrantel pamoate  质量规格：含量测定 Ricinuscommunisagglinin,RCAELISAKit蓖麻凝集素(RCA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

双羟萘酸（标准品）  Pamoic acid  质量规格：含量测定 P21基因表达北方杂交分析试剂盒5

酚酞（标准品）  Phenolphthalein  质量规格：含量测定 Porcineierleukin8,IL-8ELISA试剂盒猪白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒规格：96T/48T

香草醛（熔点标准品）   Vanillin  质量规格：熔点测定 小鼠谷酸脱羧酶自身抗体IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA试剂盒 ，英文名： GAD-Ab-IgG ELISA Kit

环吡酮;环匹罗司  Ciclopirox  质量规格：>99%,BR 大鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA检测试剂盒RatannexinⅤ,ANX-ⅤELISAKit 96T/48T

环吡酮;环匹罗司(标准品)  Ciclopirox  质量规格：HPLC>99%,标准品 人白细胞调节素(LR)试剂盒 Human leukoregulin,LR ELISA Kit
ε-聚赖氨酸  Epsilon Polylysine   质量规格：溶解性数据为19.8,分子量小于5000 大鼠凝溶胶蛋白(Gelsolin)试剂盒 Rat Gelsolin ELISA Kit

普罗雌烯  Promestriene  质量规格：≥99.0%,BR 大鼠凝血酶抗凝血酶Ⅲ复合物(TAT-III)试剂盒 Rat thrombin-aithrombin III complex,TAT-III ELISA Kit

波生坦(水合物)  Bosentan hydrate  质量规格：≥98.5%（HPLC）,BR,一水合物 大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA检测试剂盒Ratthrombin-aithrombincomplex,TATELISAKit 96T/48T

波生坦水合(标准品)  Bosentan hydrate  质量规格：HPLC≥98%,标准品 大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)试剂盒 Rat thrombin-aithrombin complex,TAT ELISA Kit

福沙吡坦二甲葡胺(MK-0517)   Fosaprepitant dimeglumine  质量规格：>99.0%;P/神经激肽受体拮抗剂 大鼠凝血酶受体()ELISA检测试剂盒Ratthrombieceptor,ELISAKit 96T/48T

普拉格雷  Prasugrel  质量规格：≥99.0%,BR 大鼠凝血酶受体()试剂盒 Rat thrombin receptor, ELISA Kit

盐酸可乐定  Clonidine hydrochloride   质量规格：>98.0%,BR 大鼠凝血酶原片段F1+2(F1+2)试剂盒 Rat prothrombin fragme 1+2,F1+2 ELISA Kit

盐酸可乐定(标准品)  Clonidine hydrochloride   质量规格：HPLC>99%,标准品 大鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA检测试剂盒RatcoagulationfactorⅡ,FⅡELISAKit 96T/48T

2-甲氧基雌二醇(进分)  2-Methoxyestradiol  质量规格：进分，SigmaM6383 大鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)试剂盒 Rat coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA Kit

2-甲氧基雌二醇  2-Methoxyestradiol  质量规格：≥98.0%,国产 大鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA检测试剂盒RatcoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISAKit 96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。