PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：蓝舌病病毒通用PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

肝生素/肝细胞生长因子   英文名称：   hepatocyte growth factor   规格：   48T/96T   英文缩写：   HGF  Przewaquinone A  76843-23-7  中文名：紫丹参甲素  分子式：C19H18O4 

肝/肌糖元检测   Lipofuscin (including colorimeic detection)  Racecadotril  81110-73-8  中文名：消旋卡多曲  分子式：C21H23NO4S  度：98.0%  关键词： 

肝/肌糖元测试盒   Liver / muscle glycogen test kit  4,6-Dichloro-2-(propylthio)pyrimidin-5-amine  145783-15-9  中文名：  分子式：C7H9Cl2N3S 

甘油三酯（TG酶法）测试盒   Serum high-density lipoprotein (HDL) test kit  Oxytetracycline hydrochloride  2058-46-0  中文名：盐酸土霉素  分子式：C22H25ClN2O9  度：98.0%   

甘油三酯（TG）含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样  Atorvastatin calcium  中文名：阿托伐他汀钙  分子式：C33H35FN2O5  度：98.0%
2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid  91702-98-6  中文名：  分子式：C12H14O3S    人趋化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISAKit  

Cinnamyl 3-aminobut-2-enoate  113898-97-8  中文名：  分子式：C13H15NO2    人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISAKit  

2-Deoxy-2,2-difluoro-D-erythro-pentafuranous-1-ulose-3,5-dibenzoate  122111-01-7  中文名：  分子式：C19H14F2O6    人碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISAKit              

D-Mannitol diacetonide  1707-77-3  中文名：  分子式：C12H22O6    人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白elisa试剂盒   人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白试剂盒、人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Pemetrexed  137281-23-3  中文名：培美曲塞二钠  分子式：C20H21N5O6    人中性粒细胞碱性0酸酶elisa试剂盒   人中性粒细胞碱性0酸酶试剂盒   规格型号：96T/48T   人中性粒细胞碱性0酸酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人中性粒细胞碱性0酸酶试剂盒、人中性粒细胞碱性0酸酶elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
蓝舌病病毒通用PCR检测试剂盒供应异鼠李素(标准品）  Isorhamnetin  质量规格：HPLC≥98%,标准品 ELISAKitTSLP人胸腺基质细胞生成素规格：48T/96T

异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(标准品)  Isorhamnetin-3-O-β-D-Glucoside  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠骨骼肌快肌肌钙蛋白I(TNNI2)ELISA试剂盒 ，英文名： TNNI2 ELISA Kit

异鼠李素-3-O-新橙皮苷(标准品)  Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside  质量规格：HPLC≥98%，标准品 人前体蛋白(TpP)ELISA检测试剂盒Humahrombusprecursorprotein,TpPELISAKit 96T/48T

异土木香内酯（标准品）  Isoalantolactone  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠酸性0酸酶(ACP)试剂盒 Rat Acid Phosphatase,ACP ELISA Kit

异乌药内酯/异乌药醚内酯（标准品）  Isolinderalactone  质量规格：HPLC≥98%，标准品 英文名称RatglialfibrillaryacidicproteinELISAKit大鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)ELISAKit规格：96T/48T

VRT752271  VRT-752271.HCl  质量规格：>98%,盐酸盐形式,蛋白激酶抑制剂 环境伤寒沙门氏菌B(SalmonellaParatyphiB)定量PCR扩增检测试剂盒20

奥巴克拉甲磺酸盐  Obatoclax Mesylate;GX15-070  质量规格：≥98%,Bcl-2拮抗剂 ELISAKitTARC/CCL17人胸腺活化调节趋化因子规格：48T/96T

淫羊藿素(标准品)  Icaritin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠骨钙素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISA试剂盒 ，英文名： OT/BGP ELISA Kit

银杏内酯A(标准品)  Ginkgolide A  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)ELISA检测试剂盒RatParathyroidHormone-LikeRelatedProtein,PTHrPELISAKit 96T/48T

银杏内酯B(标准品)  Ginkgolide B  质量规格：HPLC≥98%，标准品 人包虫抗体IgG 试剂盒 Human echinococcus aibody IgG ELISA Kit
阿替洛尔-d7  Atenolol-d7  质量规格：美国进口 英文名称HumanFree-T4ELISAKit人游离甲状腺素(Free-T4)规格：96T/48T

阿托伐他汀  Atorvastatin  质量规格：美国进口 英文名称HumanFXELISAKit人凝血因子X(FX)规格：96T/48T

4-羟基阿托伐他汀内酯  4-Hydroxy Atorvastatin Lactone  质量规格：美国进口 英文名称humanf-β-HCGELISAKIT人游离β绒毛膜激素(f-β-HCG)规格：96T/48T

2-羟基阿托伐他汀内酯  2-Hydroxy Atorvastatin Lactone   质量规格：美国进口 英文名称humanGADELISAKIT人谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD)规格：96T/48T

2-羟基阿托伐他汀内酯-d5  2-Hydroxy Atorvastatin Lactone-d5  质量规格：美国进口 英文名称HumanGamma-aminobyricacidELISAKit人γ氨基(GABA)规格：96T/48T

2-羟基阿托伐他汀单钠盐二水合物  2-Hydroxy Atorvastatin Dihydrate Mono Salt   质量规格：美国进口 英文名称HumanGATA4ELISAKit人心肌转录因子(GATA4)规格：96T/48T

阿托伐他汀内酯  Atorvastatin Lactone  质量规格：美国进口 英文名称HumanG-CSFELISAKit人粒细胞克隆刺激因子(G-CSF)规格：96T/48T

阿托伐他汀 酰基-β-D-葡萄糖醛酸苷 70%, 含 30% 内酯  Atorvastatin Acyl-β-D-glucuronide 70%, contains up to 30% lactone  质量规格：美国进口 英文名称HumanGehrelinElisakit人脑肠肽(Gehrelin)规格：96T/48T

脱氟阿托伐他汀钠  Defluoro Atorvastatin  Salt   质量规格：美国进口 英文名称HumanGelsolinELISAKit人凝溶胶蛋白(Gelsolin)ELISA试剂盒规格：96T/48T

阿托伐他汀内酯-d5  Atorvastatin-d5 Lactone  质量规格：美国进口 英文名称HumanghrelinELISAKit人生长激素释放多肽(ghrelin)ELISA试剂盒规格：96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。