PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：1牛腺病毒通用PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

金黄地鼠可溶性间黏附分子1   英文名称：   Golden hamster soluble Vascular Cellular Adhesion Molecule 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   sVCAM-1  Alogliptin benzoate  中文名：阿格列汀苯甲酸盐  分子式：C25H27N5O4  度：98.0%

金黄地鼠坏死因子α   英文名称：   Golden hamster Tumor Necrosis Factor α   规格：   48T/96T   英文缩写：   TNFα  Alogliptin benzoate  中文名：阿格列汀苯甲酸盐  分子式：C25H27N5O4 

结核分枝杆菌抗体   英文名称：   Mycobacterium Tuberculosis Aibody   规格：   48T/96T   英文缩写：   TB  p-Nitrohydrocinnamic acid  16642-79-8  中文名：  分子式：C9H9NO4  度：98.0%  关键词： 

结缔组织生长因子 (CTGF)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Araliadiol  1354638-93-9  中文名：  分子式：C15H20O2 

结蛋白 (Desmin)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Nicorandil  65141-46-0  中文名：尼可地尔  分子式：C8H9N3O4  度：98.0%  关键词：
2-Acetonaphthone  1993/8/3  中文名：2'-萘乙酮  分子式：C12H10O    人清道夫受体B类成员1(SCARB1)酶联吸附测定试剂盒   Human SCARB1 (Scavenger receptor class B member 1) ELISA kit              

1'-Acetonaphthone  941-98-0  中文名：1'-萘乙酮  分子式：C12H10O    人总铁结合力（TIBC）ELISA试剂盒  

Exemestane  107868-30-4  中文名：依西美坦  分子式：C20H24O2    人总特异抗原(tPSA)ELISA试剂盒  

Hemapolin  4267-80-5  中文名：甲基环硫雄醇中间体 E  分子式：C20H32OS    人总抗氧化能力(T-AOC)ELISA试剂盒  

Formestane  566-48-3  中文名：福美司坦  分子式：C19H26O3    人总蛋白（TP）ELISA试剂盒
1牛腺病毒通用PCR检测试剂盒直销柠檬苦素，黄柏内酯(橙皮提取)   Limonin  质量规格：HPLC≥98%,橙皮提取 大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA检测试剂盒Rat15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit 96T/48T

硬脂酸(50%)  Stearic acid  质量规格：含量50%，药用级 人表皮生长因子受体(EGFR)试剂盒 Human EGFR ELISA Kit

硬脂酸(98%)  Stearic acid  质量规格：含量98%,药用级 RatUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAKit大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA试剂盒规格：96T/48T

牛蒡苷元(标准品)  Arctigenin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 NFKAPPABP65蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25

牛蒡子苷（标准品）  Arctiin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 Porcinehepatocytegrowthfactor,HGFELISA试剂盒猪肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

日当药黄素(标准品)  Swertiajaponin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠果糖胺(FRA)ELISA试剂盒 ，英文名： FRA ELISA Kit

牛磺胆酸钠(标准品)  Taurocholic acid  Salt  质量规格：TLC≥97%，标准品 大鼠抗中性粒细胞核周抗体(pANCA)ELISA检测试剂盒RatPerinuclearai-neuophilcytoplasmicaibody,pANCAELISAKit 96T/48T

牛磺胆酸钠  Taurocholic acid  Salt  质量规格：>97%,BR 人表皮生长因子(EGF)试剂盒 Human Epidermal growth factor,EGF ELISA Kit

诺米林（标准品）  Nomilin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 RatVascularEndothelialcellGrowthFactorB,VEGF-BELISAKit大鼠内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒规格：96T/48T

欧当归内酯A（标准品）  Levistilide A  质量规格：HPLC≥98%，标准品 NFKAPPABP65蛋白共沉淀分析试剂盒5
巴氯芬(标准品)  Baclofen  质量规格：HPLC>98%,标准品 Ratmonocytechemotacticprotein3,MCP-3ELISA试剂盒大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒规格：96T/48T

巴洛沙星(标准品)  Balofloxacin Dihydrate  质量规格：> 98%,水合物标准品 Ratmonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAKit大鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒规格：96T/48T

巴洛沙星  Balofloxacin Dihydrate  质量规格：度> 98.5%,BR,二水合物 Ratmonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISA试剂盒大鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒规格：96T/48T

盐酸苯达莫司汀  Bendamustine HCl  质量规格：度> 98% RatMothersagainstdecapeaplegichomolog1,Smad1ELISAKit大鼠Smad1ELISA试剂盒规格：96T/48T

盐酸苯达莫司汀（标准品）  Bendamustine HCl  质量规格：HPLC>98%,标准品 RatMothersagainstdecapeaplegichomolog1,Smad1ELISA试剂盒大鼠Smad1ELISA试剂盒规格：96T/48T

倍他米松  Betamethasone  质量规格：>98%  RatMothersagainstdecapeaplegichomolog7,Smad7ELISAKit大鼠Smad7ELISA试剂盒规格：96T/48T

倍他米松（标准品）  Betamethasone  质量规格：HPLC>98% ,标准品 RatMothersagainstdecapeaplegichomolog7,Smad7ELISA试剂盒大鼠Smad7ELISA试剂盒规格：96T/48T

比阿培南  Biapenem  质量规格：度>97% RatMotilin,MTLELISAKit大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒规格：96T/48T

比阿培南（标准品）  Biapenem  质量规格：HPLC>98%,标准品 RatMotilin,MTLELISA试剂盒大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒规格：96T/48T

胆红素(标准品)  Bilibubin  质量规格：UV≥98%，标准品 RatMullerianInhibitingSubstance/Ai-Mullerianhormone,MIS/AMHELISAKit大鼠缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素(MIS/AMH)ELISA试剂盒规格：96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。