PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：牛病毒PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

内皮生长因子 165(VEGF165)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19 

内皮生长因子 (VEGF)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Androstanolone 17-benzoate  中文名：雄诺龙苯甲酸酯  分子式：C26H34O3  度：98.0%

紧张素转化酶   英文名称：   Angiotensin Conveing Enzyme   规格：   48T/96T   英文缩写：   ACE  Otophylloside B  中文名：青阳参苷B  分子式：C49H78O16  度：97.0%

紧张素I(素、AngI)   96T/48T  Ornidazole  中文名：奥硝唑  分子式：C7H10ClN3O3  度：98.0%

紧张素Ⅱ一型受体抗原   英文名称：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   英文缩写：   AT1R   规格：   48T/96T  Ophiopogonin D  中文名：麦冬皂苷D  分子式：C44H70O16  度：%
6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  中文名：  分子式：C5H6N4O3    乙醇脱氢酶（ADH）测定试剂盒（紫外比色法）

6-Amino-1,3-dimethyluracil  中文名：  分子式：C6H9N3O2    微量游离血红蛋白（FHb）测定试剂盒（比色法）

6,7-Dihydroneridienone A  中文名：  分子式：C21H28O3    超微量Na+K+–ATP酶测定试剂盒

6,6'-Di-O-sinapoylsucrose  中文名：6,6'- 二芥子酰基蔗糖  分子式：C34H42O19    胰蛋白酶测定试剂盒（紫外比色法）                 

6-(5-Chloropyridin-2-yl)-7-hydroxy-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin-5-one  中文名：  分子式：C11H7ClN4O2    乙醇酸氧化酶测试盒   可见分光光度法   50管/48样
牛病毒PCR检测试剂盒直销DL色氨酸 HPLC≥98% 200mg 人基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)试剂盒 Human TIMP-3 ELISA Kit

DL缬氨酸 HPLC≥98% 200mg RatCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit大鼠Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

DL亮氨酸 HPLC≥98% 200mg 10%辛基-β-D-硫代葡萄糖苷(Octyl-β-D-thioglucopyranoside)1毫升

DL谷氨酸 HPLC≥98% 200mg MouseCalfiestinalalkalinephosphatase,CIAPELISA试剂盒小鼠牛小肠碱性0酸酶(CIAP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

青霉素V钾 HPLC≥97% 100mg 小鼠血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA 试剂盒

去氢茯苓酸  HPLC≥98% 10mg Rat muscarinic acetylcholine receptor (M-AChR) ELISA Kit 大鼠毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)ELISA试剂盒

刺五加苷D HPLC≥98% 20mg Humanα-galactosidase,αGALELISAKit 人α半乳糖苷酶(αGAL)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

葫芦素IIA HPLC≥98% 10mg CLIAKitfor(Mouseai-IgEreceptoraibody)ELISAKit小鼠抗IgE受体抗体规格：48T/96T

β,β二甲基丙烯酰紫草素 HPLC≥98% 20mg 饮料总乳酸比色法定量检测试剂盒20

黄华碱 HPLC≥98% 20mg MouseIerleukin4,IL-4ELISAKit小鼠白介素4(IL-4)ELISA试剂盒规格：96T/48T
香橙素，香树素 HPLC≥98% 5mg RabbitIerleukin3,IL-3ELISA试剂盒兔子白介素3(IL-3)ELISA试剂盒规格：96T/48T

小构树醇 B HPLC≥98% 5mg rabbitImmunoglobulinA,IgAELISA试剂盒兔子球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

小叶九里香内酯 HPLC≥98% 5mg rabbitImmunoglobulinE,IgEELISA试剂盒兔子球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒规格：96T/48T

小芸木香豆精 HPLC≥98% 5mg rabbitImmunoglobulinG,IgGELISA试剂盒兔子球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒规格：96T/48T

泻根醇酸 HPLC≥98% 5mg Rabbitinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISA试剂盒兔诱导型合成酶(iNOS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

辛可宁 HPLC≥98% 5mg rabbitInsulin,INSELISA试剂盒兔子胰岛素(INS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

辛夷烯酮 HPLC≥98% 5mg rabbitInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISA试剂盒兔子胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

新比克白芷内酯 HPLC≥98% 5mg rabbitInsulin-likegrowthfactor2,IGF-2ELISA试剂盒兔子胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T

新槐胺 HPLC≥98% 5mg RabbitoponinⅠ,Tn-ⅠELISAKit兔肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒规格：96T/48T

星鱼甾醇 HPLC≥98% 5mg RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISAKit兔素B2(TXB2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。