PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：同牛病毒2型牛乳头炎病毒PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

绿脓杆菌(PA)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T  3-Quinuclidinone  3731-38-2  中文名：3-奎宁环酮  分子式：C7H11NO 

绿脓杆菌(PA)核酸检测试剂盒   48T  3-Oxo-4-aza-5-alpha-androstane-17β-carboxylic acid  中文名：  分子式：C19H29NO3  度：98.0%

鹿胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISAKit     3-Benzalphthalide  575-61-1  中文名：3-亚苄基苯酞  分子式：C15H10O2 

鹿血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISAKit                 3-Aminopiperidine dihydrochloride  中文名：  分子式：C5H14Cl2N2 

鹿内皮型合成酶(eNOS)ELISAKit     3-Aminopiperidine dihydrochloride  中文名：  分子式：C5H14Cl2N2  度：98.0%
Androstenediol-3-acetate  1639-43-6  中文名：雄甾烯二醇-3-乙酸酯  分子式：C21H32O3    人铁蛋白(FE)酶联吸附测定试剂盒   Human FE (Ferritin) ELISA Kit               

Methenolone enanthate  303-42-4  中文名：美替诺龙庚酸酯  分子式：C27H42O3    人组织因子(TF)ELISA试剂盒  

Methenolone acetate  434-05-9  中文名：美替诺龙醋酸酯  分子式：C22H32O3    人组织型纤维溶酶激活物（t-PA）ELISA试剂盒  

Androst-2-en-17-one  963-75-7  中文名：5α-雄甾-2-烯-17-酮  分子式：C19H28O    人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒  

Epiandrosterone  481-29-8  中文名：表雄酮  分子式：C19H30O2    人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因D（MICD）ELISA试剂盒
同牛病毒2型牛乳头炎病毒PCR检测试剂盒供应具栖冬青苷(标准品)  Pedunculoside  质量规格：HPLC≥98%，标准品 Porcinegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISA试剂盒猪生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒规格：96T/48T

科罗索酸（标准品）  Corosolic Acid  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠/乳过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒 ，英文名： LPO ELISA Kit

可可碱（标准品）  Theobromine  质量规格：≥99%，标准品 大鼠内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA检测试剂盒RatEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 96T/48T

苦参碱(标准品)  Matrine  质量规格：HPLC≥98%，标准品 人氨酸转氨酶/谷转氨酶(ALT/GPT)试剂盒 Human ALT/GPT ELISA Kit

苦参碱  Matrine  质量规格：≥97%,BR Ratulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit大鼠高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)ELISA试剂盒规格：96T/48T

D-(-)-奎宁酸（标准品）  D-(?)-Quinic acid  质量规格：≥98%，标准品 NAD浓度比色法定量检测试剂盒20/80

辣椒碱,辣椒素（天然提取标准品）  Capsaicin  质量规格：辣椒碱含量HPLC≥98%,标准品 Porcinegrowthhormone,GHELISA试剂盒猪生长激素(GH)ELISA试剂盒规格：96T/48T

辣椒碱,辣椒素(天然提取)  Capsaicin  质量规格：辣椒总碱>98%,辣椒单碱>55% 小鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)ELISA试剂盒 ，英文名： PPAR-γ ELISA Kit

辣椒碱,辣椒素(合成)  Capsaicin  质量规格：>99% 大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA检测试剂盒Ratα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit 96T/48T

莱苞迪甙C（标准品）  Rebaudioside C  质量规格：HPLC≥98%，标准品 人别孕烯醇酮/3α,5α-四氢孕酮(AP/3α,5α-THP)试剂盒 Human allopregnanolone/3α,5α-teahydroprogesterone,AP/3α,5α-THP ELISA kit
白鲜碱(标准品)  Dictamnine  质量规格：HPLC≥98%,标准品 人细胞色素P450c21A/21-羟化酶(CYP21A)ELISA检测试剂盒HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21AELISAKit 96T/48T

罗替戈汀  Rotigotine  质量规格：>95%,BR 人细胞色素P450c21B/21-羟化酶(CYP21B)ELISA检测试剂盒HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21BELISAKit 96T/48T

盐酸罗替戈汀  Rotigotine Hydrochloride  质量规格：>97%,BR 人细胞外基质0酸糖蛋白(MEPE)ELISA检测试剂盒Humanmaixexacellularphosphoglycoprotein,MEPEELISAKit 96T/48T

右雷佐生盐酸盐;右丙亚胺盐酸盐  Dexrazoxane HCl  质量规格：>99%,BR 人纤溶酶/纤维蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA检测试剂盒Humanplasmin/fibrinolysin,PL/FbnELISAKit 96T/48T

SGI-1776  SGI-1776；SGI1776  质量规格：>98%,Pim1抑制剂 人纤调蛋白(fibromodulin)ELISA检测试剂盒HumanfibromodulinELISAKit 96T/48T

JNJ-26854165 (Serdemetan)  JNJ 26854165  质量规格：>98% 人纤维介素蛋白(fgl2)ELISA检测试剂盒HumanFibrinogenlikepeptide2,fgl2ELISAKit 96T/48T

SB505124  SB-505124  质量规格：>98% 人纤维连接素相关抗原(FRA)ELISA检测试剂盒Humanfibronectioelatedaigen,FRAELISAKit 96T/48T

NLG919  NLG-919  质量规格：>98%,IDO抑制剂 人纤维母细胞表面抗原(FSP)ELISA检测试剂盒HumanFibroblastsurfaceprotein,FSPELISAKit 96T/48T

维莫德吉(GDC0449)  Vismodegib;GDC-0449  质量规格：>98%,hedgehog抑制剂 人酰辅酶A羧化酶β多肽(PCCB)试剂盒 Human PCCB ELISA Kit

Zosuquidar；LY335979  LY-335979  质量规格：>98% 人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA检测试剂盒HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISAKit 96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。