PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：牛病毒型PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

柠檬酸（CA）含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样              Rizatriptan benzoate  145202-66-0  中文名：苯甲酸利扎曲坦  分子式：C22H25N5O2 

镍快速测试盒   Nickel rapid test case  Ranitidine  66357-35-5  中文名：雷尼替丁  分子式：C13H22N4O3S  度：98.0%  关键词： 

镍测试盒   Nickel test case  4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester  中文名：  分子式：C16H16N4O3  度：98.0%

尿酸含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样              Tropisetron hydrochloride  105826-92-4  中文名：盐酸托烷司琼  分子式：C17H21ClN2O2 

尿激酶型纤溶酶原激活因子受体 (uPA-R)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     O-Benzyl-L-tyrosine  16652-64-5  中文名：O-苄基-L-酪氨酸  分子式：C16H17NO3
Ampicillin Trihydrate  7177-48-2  中文名：氨苄西林三水酸  分子式：C16H19N3O4S    普氏立克次体(RP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

2-Acetylfluorene  781-73-7  中文名：2-乙酰芴  分子式：C15H12O    莫氏立克次体(RM)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T              

1-Allyl-3,5-Dimethylpyrazole  13369-74-9  中文名：1-烯丙基-3,5-二甲基吡唑  分子式：C8H12N2    瑞氏－姬姆萨复合染液   Vascular permeability test solion

(1R,2S)-2-Amino-1,2-diphenylethanol  23190-16-1  中文名：(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇  分子式：C14H15NO    姬姆萨染液   Peroxidase staining

5,6-Dimethyl-2-Benzothiazolamine  29927-08-0  中文名：5,6-二甲基-2-苯并噻唑胺  分子式：C9H10N2S    巴氏染液（脱落细胞染色）   Name
牛病毒型PCR检测试剂盒供应甘草酸二铵盐  Diammonium Glycyrrhizate  质量规格：UV≥97%,BR ELISAKitANG人生长素规格：48T/96T

橄榄苦苷（标准品）  Oleuropein  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠核连蛋白1(NUCB1)ELISA试剂盒 ，英文名： NUCB1 ELISA Kit

高丽槐素(标准品)  Maackiain  质量规格：HPLC≥98%，标准品 人甘露糖受体(MR)ELISA检测试剂盒Humanmannosereceptor,MRELISAKit 96T/48T

高良姜素(标准品）  Galangin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠褪黑素(MT)试剂盒 Rat Melatonin,MT ELISA Kit

高三尖杉酯碱(标准品）  Homoharringtonine  质量规格：HPLC≥98%，标准品 英文名称RatGlycogenphosphorylaseIIELISAKit大鼠糖原0酸化酶同工酶II(GPII)规格：96T/48T

高香草酸(标准品)  Homovanillic acid  质量规格：HPLC≥98%，标准品 胡萝卜(carrot)完全培养基500毫升溶液/片剂

告达亭苷元  caudatin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 ELISAKitVCAM-1/CD106人内皮细胞粘附分子1规格：48T/96T

格列风内酯（标准品）  Griffonilide  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠核苷酸还原酶M1(RRM1)ELISA试剂盒 ，英文名： RRM1 ELISA Kit

葛根素(标准品)  Puerarin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 人甘露糖(Mannose)ELISA检测试剂盒HumanMannoseELISAKit 96T/48T

葛根素  Puerarin  质量规格：HPLC≥98%，BR 大鼠突触体素/突触素(Syp/SYN)试剂盒 Rat Synaptophysin,Syp ELISA kit
苯并［g,h,i］芘(标准品)  Benzo[ghi]perylene  质量规格：分析标准品 犬α-3干扰素(IFN-α3)试剂盒 Canine Ierferon alpha-3,IFN-α3 ELISA kit

1-十八烯(标准品)  1-Octadecene  质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC) 犬α干扰素(IFN-α)ELISA检测试剂盒CanineIerferonα,IFN-αELISAKit 96T/48T

辛胺(标准品)  n-Octylamine  质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC) 犬β2微球蛋白(BMG/β2-MG)试剂盒 Dog β2-microglobulin,BMG/β2-MG ELISA Kit

十八烷(标准品)  Octadecane  质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC) 犬β内啡肽(β-EP)ELISA检测试剂盒CanineBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 96T/48T

2-辛酮(标准品)  2-Octanone  质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC) 犬β内啡肽(β-EP)试剂盒 Canine Beta-Endorphin,β-EP ELISA Kit

苯氧乙酸(标准品)  Phenoxyacetic acid  质量规格：分析标准品 犬γ氨基(GABA)ELISA检测试剂盒CanineGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit 96T/48T

菲(标准品)  Phenanthrene  质量规格：分析标准品,用于环境分析 犬γ氨基(GABA)试剂盒 Canine Gamma-aminobyric acid,GABA ELISA Kit

芘(标准品)  Pyrene  质量规格：分析标准品 犬γ干扰素(IFN-γ)试剂盒 Dog Ierferon γ ,IFN-γ ELISA Kit

(-)-盐酸东莨菪碱(标准品)  (?)-Scopolamine hydrochloride  质量规格：分析标准品,99.0% 犬癌胚抗原(CEA)试剂盒 Canine carcinoembryonic aign,CEA ELISA Kit

十四烷(标准品)  Tetradecane  质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC) 犬白介素1(IL-1)试剂盒 Canine Ierleukin 1,IL-1 ELISA Kit
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。