PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：牛病毒2型PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

球蛋白IgM   英文名称：    immunoglobulin M   规格：   48T/96T   英文缩写：   IgM  Testosterone undecanoate  中文名：十一酸睾酮  分子式：C30H48O3 

球蛋白 IgG(IgG)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     Ponasterone A  13408-56-5  中文名：坡那甾酮A  分子式：C27H44O6 

球蛋白 IgE(IgE)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Ponasterone A  13408-56-5  中文名：坡那甾酮A  分子式：C27H44O6  度：98.0%  关键词：  台湾罗汉松; 蜕皮甾; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

球蛋白 IgA(IgA)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Ponasterone A  中文名：坡那甾酮A  分子式：C27H44O6 

绵羊球蛋白G   英文名称：   Immunoglobulin G   规格：   48T/96T   英文缩写：   IgG  3-Ethoxyandrosta-3,5-dien-17β-ol  中文名：3-乙氧基雄-3,5-二烯-17β醇  分子式：C21H32O2
2-Amino-3-chloro-1,4-naphthoquinone  2797-51-5  中文名：2-氨基-3-氯-1,4-萘醌  分子式：C10H6ClNO2    还原型谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒（微板法）                 

2-Amino-6-chlorobenzothiazole  95-24-9  中文名：2-氨基-6-氯苯并噻唑  分子式：C7H5ClN2S    乳酸（LD）测试盒（测全血）   Lactic acid (LD) test case (whole blood)

Solvent Yellow 3  97-56-3  中文名：溶剂黄  分子式：C14H15N3    乳酸（LD）测试盒（测血清、组织等）   Lactic acid (LD) test case (serum, tissue, etc.)

3-Acetylcoumarin  3949-36-8  中文名：3-乙酰基香豆素  分子式：C11H8O3    乳酸脱氢酶（LDH）测试盒   Lactate dehydrogenase (LDH) test kit

7-Acetoxy-4-methylcoumarin  2747/5/9  中文名：7-乙酰氧基-4-甲基香豆素  分子式：C12H10O4    苹果酸脱氢酶测试盒（测血清）   Apple acid dehydrogenase test case (Ce Xueqing)
牛病毒2型PCR检测试剂盒直销黄柏酮（标准品）  Obacunone   质量规格：HPLC≥98%，标准品 人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISA检测试剂盒Humaerminaldeoxynucleotidylansferase,TdTELISAKit 96T/48T

黄豆黄苷（标准品）  Glycitin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠铜蓝蛋白(CP)试剂盒 Rat ceruloplasmin(ferroxidase)(CP)ELISA kit

黄豆黄素（标准品）  Glycitein  质量规格：HPLC≥98%，标准品 英文名称RatcarbonicanhydraseELISAKit大鼠酶(CA)规格：96T/48T

黄独素B(标准品)  Diosbulbin B  质量规格：HPLC≥98%，标准品 化妆品阿斯巴塘(aspaame)含量薄层色谱法定性检测试剂盒20

黄连碱（标准品）  Coptisine  质量规格：HPLC≥98%，标准品 ELISAKitVEGF-B人内皮细胞生长因子B规格：48T/96T

黄芪皂苷I(标准品)  Astragaloside I  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠含TCP1伴侣蛋白亚基2(CCT2)ELISA试剂盒 ，英文名： CCT2 ELISA Kit

黄芪皂苷II(标准品)  Astragaloside II  质量规格：HPLC≥98%，标准品 人脱氧尿三0酸(DP)ELISA检测试剂盒Humandeoxyuridineiphate,DPELISAKit 96T/48T

黄芪皂苷III(标准品)  Astragaloside III  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠同型半胱氨酸(Hcy)试剂盒 Rat Homocysteic acid,Hcy ELISA Kit

黄芪总皂苷（标准品）  Astragaloside  质量规格：UV≥98%，标准品 英文名称RatcarbonicanhydraseELISAKit大鼠酶(CA)规格：96T/48T

黄杞苷（标准品）  Engeletin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 化妆品阿斯巴塘(aspaame)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒20
半乳糖（标准品）  D-GALACTOSE 1-[2-(2-AZIDOETHOXY)ETHOXYETHYL]-2,3,4,6-TETRA-O-ACETATE  质量规格：供检查用 小鼠卵0脂胆脂酰转移酶(LCAT)ELISA试剂盒 ，英文名： LCAT ELISA Kit

富马酸氯马斯汀（标准品）  Clemastine fumarate  质量规格：HPLC含量测定 小鼠卵白蛋白(OVA)ELISA试剂盒 ，英文名： OVA ELISA Kit

富马酸氯马斯汀  Clemastine fumarate  质量规格：>98%,BR 小鼠卵泡抑素(FS)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

富马酸酮替芬（标准品）  Ketotifen fumarate  质量规格：含量测定 小鼠卵泡抑素(FS)ELISA检测试剂盒MouseFollistatin,FSELISAKit 96T/48T

己内酰胺（标准品）  2-Oxohexamethylenimine  质量规格：供检查用 小鼠卵泡抑素(FS)ELISA试剂盒 ，英文名： FS ELISA Kit

苯丙哌啉（标准品）  Benproperine phosphate  质量规格：含量测定 小鼠卵泡抑素样蛋白3(FSTL3)ELISA试剂盒 ，英文名： FSTL3 ELISA Kit

米诺地尔（标准品）  Minoxidil  质量规格：含量测定 小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)ELISA试剂盒 ，英文名： OVA sIgE ELISA Kit

7-羟基-4-甲基香豆素（标准品）  7-Hydroxy-4-methylcoumarin  质量规格：≥97%,标准品 小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVAsIgE)ELISA检测试剂盒MouseovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit 96T/48T

7-羟基-4-甲基香豆素  7-Hydroxy-4-methylcoumarin  质量规格：≥97%,BR 小鼠卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)ELISA试剂盒 ，英文名： OVA sIgG ELISA Kit

十一酸睾酮（标准品）  Testosterone undecanoate  质量规格：含量测定 小鼠轮状病毒(RV)抗原(Ag)ELISA试剂盒 ，英文名： Ag ELISA Kit
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。