PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：犬腺病毒PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

人脂多糖结合蛋白(LBP)ELISAKit     2-Benzylsuccinic acid  3972-36-9  中文名：  分子式：C11H12O4  度：98.0%  关键词： 

人脂多糖elisa试剂盒   人脂多糖试剂盒   规格型号：96T/48T   人脂多糖试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人脂多糖试剂盒、人脂多糖elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  2-Benzylacrylic acid  5669-19-2  中文名：  分子式：C10H10O2  度：98.0%  关键词： 

人脂多糖/内(LPS)ELISA试剂盒     2-Benzylsuccinic acid  中文名：  分子式：C11H12O4  度：98.0%

人脂蛋脂酶A2elisa试剂盒   人脂蛋脂酶A2试剂盒   规格型号：96T/48T   人脂蛋脂酶A2试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人脂蛋脂酶A2试剂盒、人脂蛋脂酶A2 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     2-Benzyl-2-(dimethylamino)-4'-morpholinobutyrophenone  中文名：2-苄基-2-(二甲基氨基)-4'-吗啉基苯基丁酮  分子式：C23H30N2O2 

人脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA试剂盒     2-Benzoylbenzoic acid  85-52-9  中文名：2-苯甲酰苯甲酸  分子式：C14H10O3  度：98.0%
2-Amino-4-methylbenzothiazole  1477-42-5  中文名：2-氨基-4-甲基苯并噻唑  分子式：C8H8N2S    Bite   1kg

2-Amino-6-methylbenzothiazole  2536-91-6  中文名：2-氨基-6-甲基苯并噻唑  分子式：C8H8N2S    四硼酸   5kg

5-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  119-79-9  中文名：5-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S    Borate,Decahydrate   500g              

2-Aminophenyl phenyl sulfide  1134-94-7  中文名：2-氨基二苯硫醚  分子式：C12H11NS    肽酶抑制因子3   英文名称：   Human Peptidase Inhibitor 3   规格：   48T/96T   英文缩写：   PI-3

12-Aminolauric acid  693-57-2  中文名：12-氨基十二酸  分子式：C12H25NO2    过氧化物酶体增殖物活化受体γ   英文名称：   Human Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   规格：   48T/96T   英文缩写：   PPARγ
犬腺病毒PCR检测试剂盒直销化新斯的明(标准品)  Neostigmine bromide  质量规格：>98%,标准品 Humanaimousaibody,HAMAELISA人抗鼠抗体(HAMA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

木兰脂素  Magnolin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 植物羟赖氨酸(HYL)含量比色法定量检测试剂盒20

消旋山莨菪碱  Racanisodamine  质量规格：HPLC≥98%，标准品 Humanurinaryfreecoisol,UFCELISAKit人尿游离皮质醇(UFC)ELISA试剂盒规格：96T/48T

磺胺间二甲氧嘧啶钠  Sulfadimethoxine  salt  质量规格：>98% 小鼠黄体生成素(LH)ELISA试剂盒 ，英文名： LH ELISA Kit

磺胺间二甲氧嘧啶钠(标准品)  Sulfadimethoxine  salt  质量规格：>98%,标准品 大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA检测试剂盒Ratlipoproteinlipase,LPLELISAKit 96T/48T

毛地黄毒苷配基  Digitoxigenin  质量规格：>97.0%(LC),原装进口 人补体蛋白5(C5)试剂盒 Human Compleme 5,C5 ELISA Kit

柯诺辛碱  Corynoxine  质量规格：HPLC≥95%，标准品 RatToll-likereceptor4,TLR4ELISAKit大鼠Toll样受体4(TLR4)ELISA试剂盒规格：96T/48T

乌拉地尔(标准品)  Urapidil  质量规格：HPLC>98%,标准品 M9培养基500毫升

夫西地酸钠  Fusidate   质量规格：>97%,BR PorcineCoicosterone,COELISA试剂盒猪皮质同/肾上腺同(CO)ELISA试剂盒规格：96T/48T

夫西地酸钠(标准品)  Fusidate   质量规格：HPLC≥98%,标准品 小鼠黄体激素(LH)ELISA试剂盒 ，英文名： LH ELISA Kit
橙黄Ⅰ  OrangeⅠ  质量规格：IND 颉氨霉素溶液(Valinomycin)0.1毫摩尔

蓝VF   Patent Blue VF  质量规格：Indicator 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20

酚酞(IND)  Phenolphthalein  质量规格：IND 金黄色葡萄球菌肠A(Staphylococcusaureus:eerotoxinA)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20

化钾溶液(100g/L)  Potassium iodide solution  质量规格：100g/L 金黄色葡萄球菌肠B(Staphylococcusaureus:eerotoxinB)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20

化钾溶液(1/60mol/L(0.1N))  Potassium iodide solution  质量规格：1/60mol/L(0.1N) 金黄色葡萄球菌肠C(Staphylococcusaureus:eerotoxinC)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20

玫红酸(AR)  Rosolic acid  质量规格：AR 金黄色葡萄球菌肠D(Staphylococcusaureus:eerotoxinD)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20

玫红酸(指示剂级)  Rosolic acid  质量规格：指示剂级 金黄色葡萄球菌肠E(Staphylococcusaureus:eerotoxinE)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20

草酸钠容量分析用溶液标准物质   oxalate solution for volumetric analysis  质量规格：分析标准品,99.96% 金黄色葡萄球菌肠G(Staphylococcusaureus:eerotoxinG)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20

百里香酚蓝(IND)  Thymolblue  质量规格：IND 经典水相封片液10毫升

百里香酚蓝(ACS reagent,95 %)  Thymolblue  质量规格：ACS reagent,95 % 精氨酸(ARG)氧化高效液相色谱(HPLC)分析试剂盒20
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。