PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：猪布鲁氏杆菌PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

人抗原(CCA)ELISAKit     3-(Boc-Amino)  309956-78-3  中文名：  分子式：C10H20N2O2 

人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISAKit     2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)quinoline-3-carboxaldehyde  中文名：  分子式：C19H14FNO  度：98.0%

人碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISAKit                 2-Cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)quinoline-3-carboxaldehyde  中文名：  分子式：C19H14FNO 

人基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISAkit     2-Methylanthraquinone  84-54-8  中文名：2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O2 

人基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISAKit     中文名：  分子式：C29H39N5O8  度：98.0%  关键词：
Benzimidazole  51-17-2  中文名：苯并咪唑  分子式：C7H6N2    骨桥蛋白 ( Osteopoin)   作用：   ELISA   规格：   96T   德国 IBL

Benzoin oxime  441-38-3  中文名：安息香肟  分子式：C14H13NO2    OX-40 ELISA Kit   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender

Benzopinacol  464-72-2  中文名：苯频哪醇  分子式：C26H22O2    Human sP53 Kit   作用：   ELISA   规格：   96T   法国 Diaclone  

5-Benzimidazolecarboxylic acid  15788-16-6  中文名：5-苯并咪唑甲酸  分子式：C8H6N2O2    神经营养素 3(-3)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

m-Anisic acid  586-38-9  中文名：间茴香酸  分子式：C8H8O3    神经营养素 4(-4)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装
猪布鲁氏杆菌PCR检测试剂盒直销rU亚磷酰胺单体  rU Phosphoramidite  质量规格：>98%,BR 英文名称RatVitaminB6ELISAKit大鼠维生素B6(VB6)规格：96T/48T

Bz-rA亚磷酰胺单体  Bz-rA Phosphoramidite  质量规格：>98%,BR 烘赔食品乙酸激酶法定量检测试剂盒20

i-bu-rG亚磷酰胺单体  i-bu-rG Phosphoramidite  质量规格：>98%,BR ELISAKitHb-AGE人血红蛋白晚期糖基化终末产物规格：48T/96T

PF299804（EGFR抑制剂）  Dacomitinib  质量规格：>99%,可用于细胞培养 小鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)ELISA试剂盒 ，英文名： MC Ab ELISA Kit

Ac-rC亚磷酰胺单体  Ac-rC Phosphoramidite  质量规格：>98%,BR 大鼠黑色素细胞抗体(MCAb)ELISA检测试剂盒Ratmelanocyteaibody,MCAbELISAKit 96T/48T

素(含柠檬酸盐缓冲液)  Tetrodotoxin  质量规格：>98%,进分 人波形蛋白(VIM)试剂盒 Human vimein ELISA Kit

素粉  Tetrodotoxin  质量规格：>98%,进分 Rati-iodothyronine,T3ELISAKit大鼠三甲状腺原氨酸(T3)ELISA试剂盒规格：96T/48T

AC-DC亚磷酰胺单体  Ac-dC Phosphoramidite  质量规格：>97%,BR MHPG高效液相色谱电化学定量检测试剂盒20

2,2'-脱水-5-甲基尿苷  2,2'-Anhydro-5-Me-U  质量规格：>97%,BR PorcineEpinephrine/Adrenaline,EPIELISA试剂盒猪(EPI)ELISA试剂盒规格：96T/48T

7-DEAZA-7--2'-脱氧鸟苷  7-Deaza-7-I-2’-dG  质量规格：>97% 小鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)ELISA 试剂盒
表儿茶素没食子酸酯  ECG   质量规格：HPLC≥98%，BR 小鼠弹性蛋白微原纤维界面因子2(EMILIN2)ELISA试剂盒 ，英文名： EMILIN2 ELISA Kit

莱苞迪甙A  Rebaudioside A  质量规格：>98%,BR 小鼠蛋白C(PROC)ELISA试剂盒 ，英文名： PROC ELISA Kit

莱苞迪甙A（标准品）  Rebaudioside A  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠蛋白C(Protein C)ELISA试剂盒 ，英文名： Protein C ELISA Kit

环亮氨酸甲酯盐酸盐  Cycloleucine Methyl Ester.HCl  质量规格：>98% 小鼠蛋白p53(TP53)ELISA试剂盒 ，英文名： TP53 ELISA Kit

水溶性四氮唑-3  GLT003  质量规格：BR 小鼠蛋白Z(PROZ)ELISA试剂盒 ，英文名： PROZ ELISA Kit

三新戊醇  Trisbromoneopentyl Alcohol   质量规格：>97% 小鼠蛋白二硫化物异构酶A2(PDIA2)ELISA试剂盒 ，英文名： PDIA2 ELISA Kit

水溶性四氮唑-1  GLT001  质量规格：BR 小鼠蛋白二硫化物异构酶A4(PDIA4)ELISA试剂盒 ，英文名： PDIA4 ELISA Kit

Tricine；三(羟甲基)甲基甘氨酸  Tricine  质量规格：>99% 小鼠蛋白激酶A(PKA)ELISA试剂盒 ，英文名： PKA ELISA Kit

三(羟甲基)甲基甘氨酸（标准品）  Tricine  质量规格：HPLC>99%,日本进口 小鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

SAR245409 (XL765)  SAR245409 (XL-765)  质量规格：>98%,双重mTOR/PI3K抑制剂  小鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA检测试剂盒MouseproteinkinaseB,PKBELISAKit 96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。