PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：中华枝睾吸虫PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

杆菌(YP)核酸检测试剂盒   48T  3β-Hydroxyergost-5-en-7-one  156767-69-0  中文名：  分子式：C28H46O2 

噬中性及细胞活化肽 -2(NAP-2)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Testosterone isocaproate  中文名：异己酸睾酮  分子式：C25H38O3 

噬酸性粒细胞趋化因子 -2(Eotaxin-2)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  3β-Acetoxy-5α-androstan-17β-ol  3090-70-8  中文名：3-乙酰基-5α-雄烷二醇  分子式：C21H34O3  度：98.0%   

嗜酸性粒细胞阳离子蛋白   英文名称：   eosinophil cationic protein   规格：   48T/96T   英文缩写：   ECP  3β,5α-Dihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  14858-07-2  中文名：  分子式：C28H44O3  度：97.0%  关键词：  灵芝; 麦角甾烷; 对照品; 标准品; 微生物代谢产物; 天然产物; 天然产物库

嗜酸性粒细胞趋化因子 (Eotaxin)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Biosource  3β,5α,9α-Trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one  88191-14-4  中文名：  分子式：C28H44O4  度：97.0%  关键词：  灵芝; 麦角甾烷; 对照品; 标准品; 微生物代谢产物; 天然产物; 天然产物库
Marsdenoside F  中文名：  分子式：C39H60O14  度：%  兔固（ALD）ELISA试剂盒  

8,14-Epoxyergosta-4,22-diene-3,6-dione  中文名：  分子式：C28H40O3  度：%  兔去甲上腺素(NA)ELISA试剂盒           

Schleicheol 1  中文名：  分子式：C30H52O2  度：%  兔去甲上腺素elisa试剂盒   兔去甲上腺素试剂盒   规格型号：96T/48T   兔去甲上腺素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔去甲上腺素试剂盒、兔去甲上腺素elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Uzarigenin digitaloside  中文名：  分子式：C30H46O8  度：97.5%  兔素F2aelisa试剂盒   兔素F2a试剂盒   规格型号：96T/48T   兔素F2a试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔素F2a试剂盒、兔素F2a elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Daturametelin I  中文名：  分子式：C34H48O10  度：93.0%  兔素E2elisa试剂盒   兔素E2试剂盒   规格型号：96T/48T   兔素E2试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔素E2试剂盒、兔素E2 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
中华枝睾吸虫PCR检测试剂盒说明书可的松(美国进口)  Cortisone  质量规格：>95%,美国进口 大鼠脱氧酚/脱氧啉(DPD)ELISA检测试剂盒Ratdeoxypyridinoline,DPDELISAKit 96T/48T

柳胺酚,利胆酚(标准品)  2-Hydroxy-N-(4-hydroxyphenyl)-benzamide  质量规格：>98%,标准品 人超敏热休克蛋白60(HSP-60)试剂盒 Human Ula Sensitive Heat Shock Protein 60,HSP-60 ELISA Kit

柳胺酚,利胆酚  2-Hydroxy-N-(4-hydroxyphenyl)-benzamide  质量规格：>98%,BR RatTestoterone,TELISAKit大鼠睾同(T)ELISA试剂盒规格：96T/48T

甲磺酸瑞波西汀  Reboxetine mesylate  质量规格：>97% K-Ras鸟苷酸酶活性分析试剂盒6

酮色林,凯他色林  Ketanserin  质量规格：>98%,BR PlaVitaminB12,VB12ELISA试剂盒植物维生素B12(VB12)ELISA试剂盒规格：96T/48T

酮色林,凯他色林(标准品)  Ketanserin  质量规格：HPLC>98%,标准品 小鼠基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒 ，英文名： MMP-8 ELISA Kit

章胺盐酸盐；正辛弗林  DL-Octopamine HCl  质量规格：>98% 大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA检测试剂盒Ratcross-linkedC-telopeptidesofTypeⅠcollagen,CⅠCPELISAKit 96T/48T

舒林酸  Sulindac  质量规格：>98%,BR 人超敏特异性抗原(PSA-U S)试剂盒 Human Ula Sensitive Prostate Specific Aigen,PSA U S ELISA Kit

舒林酸(标准品)  Sulindac  质量规格：>98%,标准品 RatTGF-beta-inducibleearlyresponsegene-1,TIEG1ELISAKit大鼠TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

托品酸(标准品)  Tropic acid  质量规格：>98% KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病毒标准曲线定量PCR扩增检测试剂盒2
蛋白激酶C（19-36）；蛋白激酶C选择性抑制蛋白  Protein Kinase C (19-36);Protein Kinase C Selective Inhibitor Protein  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞外基质蛋白1(ECM1)ELISA试剂盒 ，英文名： ECM1 ELISA Kit

蛋白激酶C（530-558）  Protein Kinase C (530-558)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞外信号调节激酶(ERK)ELISA试剂盒 ，英文名： ERK ELISA Kit

甲状旁腺激素相关蛋白拼接同种型3（104-173），人  pTH-Related Protein Splice Isoform 3 (140-173) (human)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞外信号调节激酶2(ERK2)ELISA试剂盒 ，英文名： ERK2 ELISA Kit

甲状旁腺激素（13-34），人  pTH (13-34) (human)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)ELISA试剂盒 ，英文名： SOCS-1 ELISA Kit

甲状旁腺激素（3-34），牛  pTH (3-34) (bovine)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)ELISA试剂盒 ，英文名： SOCS3 ELISA Kit

S-I-G-S-L-A-K  S-I-G-S-L-A-K  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)ELISA试剂盒 ，英文名： SOCS-3 ELISA Kit

SAMs肽  SAMs Peptide  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞周期素D1(CCND1)ELISA试剂盒 ，英文名： CCND1 ELISA Kit

猿猴病毒40大抗原氨基段肽段  Simian Virus 40 Large Tumor Antigen Amino-Terminal Peptide  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA试剂盒 ，英文名： Cyclin-D1 ELISA Kit

生长抑制素-28  Somatostatin-28  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞周期素D2(CCND2)ELISA试剂盒 ，英文名： CCND2 ELISA Kit

物质P（1-7）  Substance P (1-7)  质量规格：>95%,BR 小鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA试剂盒 ，英文名： Cyclin-D2 ELISA Kit
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。