PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：索氏梭状芽孢杆菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

突触核蛋白   英文名称：   Human α Synucleinα   规格：   48T/96T   英文缩写：   α-SYN  4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide  52298-44-9  中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺  分子式：C14H16N2O4S  度：99.0%  关键词： 

头孢苄   1g  Amprolium hydrochloride  中文名：盐酸氨丙林  分子式：C14H20Cl2N4  度：98.0%

铜兰蛋白（CP）检测   Glamate detection                 β-Anhydrouzarigenin  3080-20-4  中文名：  分子式：C23H32O3 

铜－ATP酶（Cu-ATPase）测定试剂盒（比色法）                    Repaglinide ethyl ester  147770-06-7  中文名：  分子式：C29H40N2O4 

铜（Cu）测定试剂盒（络合比色法）  Xanthopurpurin  518-83-2  中文名：1,3-二羟基蒽醌  分子式：C14H8O4  度：97.0%  关键词：
Withaperuvin C  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  兔基质金属蛋白酶 1   英文名称：   Rabbit Maix Metalloproteinase 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   MMP-1

Otophylloside O  中文名：  分子式：C56H84O20  度：96.5%  兔基质金属蛋白酶 2   英文名称：   Rabbit Maix Metalloproteinase 2   规格：   48T/96T   英文缩写：   MMP-2

Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H84O20  度：92.0%  兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit  

Otophylloside F  中文名：青阳参苷F  分子式：C48H76O16  度：95.0%  兔(NO)ELISAKit  

Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19  度：98.0%  兔补体蛋白3(C3)ELISAKit
索氏梭状芽孢杆菌PCR检测试剂盒说明书头孢匹林钠   Cefapirin   质量规格：Content 96.0-102.0%,BR 人抗酿酒酵母抗体(ASCA)ELISA检测试剂盒HumanAi-Saccharomycescerevisiaeaibody,ASCAELISAKit 96T/48T

5,7-二氯-8-羟基喹哪啶;氯喹那多  Chlorquinaldol  质量规格：>98%,BR 大鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)试剂盒 Rat Cardiac oponin Ⅰ,cTn-Ⅰ ELISA kit

癸氧喹酯;乙癸氧喹酯  Decoquinate  质量规格：>99(T) 英文名称RatTpPELISAKit大鼠前体蛋白(TpP)。规格：96T/48T

(S)-2-氨基-5-甲氧基四氢萘盐酸盐   (S)-2-Amino-5-methoxytetralin Hydrochloride  质量规格：>98% 寡核苷酸探针非同位素HRP化学发光法RNA北方杂交完全试剂盒5

巴马司他;BB94  Batimastat(BB-94)  质量规格：>98%,MMP(基质金属蛋白酶)抑制剂 ELISAKitIGFBP-1人样生长因子结合蛋白1规格：48T/96T

伊洛马司他(GM6001)  Ilomastat,GM6001,Galardin  质量规格：>98%,MMP(基质金属蛋白酶)抑制剂 小鼠激肽释放酶4(KLK4)ELISA试剂盒 ，英文名： KLK4 ELISA Kit

愈创木酚缩水甘油醚   Guaiacol glycidyl ether  质量规格：>98% 人抗髓0脂抗体IgA(ai-myelinAb)ELISA检测试剂盒Humanai-myelinaibodyIgAELISAKit 96T/48T

4-氨基安替比林  4-Aminoantipyrine  质量规格：AR,分析 大鼠腺苷酸环化酶1(AC-1)试剂盒 Rat adenylyl cyclase 1,AC-1 ELISA Kit

N-代丁二(NBS)  N-bromosuccinimide  质量规格：AR 英文名称RatSerumamyloidAELISAKit大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)规格：96T/48T

溶葡球菌酶,溶葡萄球菌酶   Lysostaphin  质量规格：BR,5000U/Pack 寡核苷酸探针同位素法DNA斑点杂交完全试剂盒5
丁草胺标准溶液(0.100mg/ml)  Butachlor solution  质量规格：0.100mg/ml 犬KI-67抗原(MKI67)试剂盒 Dog aigen KI-67,MKI67 ELISA kit

丁草胺(标准品)  Butachlor  质量规格：分析标准品,95% 犬N端前脑素(-proBNP)试剂盒 Canine N-terminal pro-brain naiuretic peptide,-proBNP ELISA Kit

丁草胺标准溶液(100μg/ml,u=4%)  Butachlor solution  质量规格：100μg/ml,u=4% 犬N端前心肽(-ProANP)试剂盒 Dog N-terminal Pro aial naiuretic peptide,-ProANP ELISA kit

丁草胺标准溶液(10μg/ml,u=7%)  Butachlor solution  质量规格：10μg/ml,u=7% 犬N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒 Canine N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit

炔草隆(标准品)  Buturon  质量规格：分析标准品 犬P物质受体(TACR1)试剂盒 Dog Substance-P receptor,TACR1 ELISA kit

螨酯标准溶液(100μg/ml,u=2%)  Bromopropylate solution  质量规格：100μg/ml,u=2% 犬P选择素(SELP)试剂盒 Dog P-selectin,SELP ELISA kit

螨酯标准溶液(10μg/ml,u=2%)  Bromopropylate solution  质量规格：10μg/ml,u=2% 犬S100B蛋白(S100B)试剂盒 Dog S100 calcium binding protein B,S100B ELISA kit

硝醇(标准品)  Bronopol  质量规格：分析标准品 犬S100钙结合蛋白A12/钙粒蛋白C(S100A12)试剂盒 Canine S100 calcium binding protein A12/Calgranulin-C,S100A12 ELISA Kit

氟草胺(标准品)  Benfluralin  质量规格：分析标准品 犬α-1/2干扰素(IFN-α1/2)试剂盒 Canine Ierferon alpha-1/2 ELISA kit

苯并(k)荧蒽(标准品)  Benzo(k)fluoranthene  质量规格：分析标准品 犬α1微球蛋白(α1-MG)试剂盒 Canine α1-microglobulin,α1-MG ELISA Kit
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。