PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：波萨达斯球孢子菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

土壤中性0酸酶（S-NP）试剂盒   可见分光光度法   50管/48样  4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  中文名：4-氨基-3-羟基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%

土壤中性0酸酶(S-NP)测试盒   可见分光光度法   50管/48样  4-Aminobenzophenone  1137-41-3  中文名：4-氨基二苯甲酮  分子式：C13H11NO  度：99.0%  关键词： 

土壤蔗糖酶(S-SC)测试盒   可见分光光度法   50管/24样              4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  中文名：4-氨基-3-羟基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S 

土壤硝态氮测试盒   可见分光光度法   50管/48样  Triamcinolone acetonide  76-25-5  中文名：曲安奈德  分子式：C24H31FO6  度：98.0%  关键词： 

土壤纤维素酶（S-CL）试剂盒   可见分光光度法    50管/24样  4-Aminoantipyrine  1983/7/8  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O  度：99.0%  关键词：
Rubioncolin C  中文名：  分子式：C27H22O6  度：98.0%  兔子白三烯B4elisa试剂盒   兔子白三烯B4试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子白三烯B4试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子白三烯B4试剂盒、兔子白三烯B4 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

Danshenxinkun A  中文名：丹参新醌甲  分子式：C18H16O4  度：98.0%  人组织相容性2-K1-K区elisa试剂盒   人组织相容性2-K1-K区试剂盒   规格型号：96T/48T   人组织相容性2-K1-K区试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：人组织相容性2-K1-K区试剂盒、人组织相容性2-K1-K区elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  

Przewaquinone A  中文名：紫丹参甲素  分子式：C19H18O4  度：98.0%  兔(rabbit NO)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

Deoxyneocryptotanshinone  中文名：  分子式：C19H22O3  度：97.5%  兔合酶(rabbit NOS)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

甾体        兔神经元烯醇化酶(rabbit NSE)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装
波萨达斯球孢子菌PCR检测试剂盒说明书盐酸阿糖胞苷  1-Beta-D-Arabinofuranosylcytosine HCl  质量规格：>98%,BR 英文名称RatNOELISAKit大鼠(NO)ELISA规格：96T/48T

盐酸阿糖胞苷(标准品)  1-Beta-D-Arabinofuranosylcytosine HCl  质量规格：HPLC>99%,标准品 寡核苷酸探针非同位素HRP-DAB显色法DNA南方杂交完全试剂盒5

盐酸马尼地平  Manidipine Dihydrochlorid  质量规格：>98%,BR ELISAKitPI人原规格：48T/96T

盐酸马尼地平(标准品)  Manidipine Dihydrochlorid  质量规格：HPLC≥98,标准品 小鼠己糖激酶(HK)ELISA试剂盒 ，英文名： HK ELISA Kit

二氢睾酮,雄诺龙  Stanolone/Androstanolone  质量规格：>97%,BR 大鼠P物质(SP)ELISA检测试剂盒RatSubstanceP,SPELISAKit 96T/48T

多拉菌素  Doramectin  质量规格：>97%,BR 人程序性死亡-1(PD-1)试剂盒 Human PD-1 ELISA Kit

3,3,5-三-L-甲状腺原氨酸，塞罗宁  3,3',5'-Triiodo-L-thyronine  质量规格：>97%,BR RatSomatostatin,SSELISAKit大鼠生长抑素(SS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Corylifol A(标准品)  Corylifol A  质量规格：HPLC≥98,标准品 IP3R受体蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25

芬酸钠  Bromfenac   质量规格：>98%,BR Pisumsativumagglinin,PSAELISA试剂盒豌豆凝集素(PSA)ELISA试剂盒规格：96T/48T

芬酸钠(标准品)  Bromfenac   质量规格：HPLC≥99,标准品 小鼠几丁质酶1(CHIT1)ELISA试剂盒 ，英文名： CHIT1 ELISA Kit
豆甾醇（标准品）  Stigmasterol  质量规格：95%,标准品,大豆来源 小鼠高敏甲状腺素(u-T4)ELISA检测试剂盒MouseUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit 96T/48T

豆甾醇  Stigmasterol  质量规格：>90 %,GC 小鼠高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒 ，英文名： u-T4 ELISA Kit

豆甾醇  Stigmasterol  质量规格：>90%,GC 小鼠高敏三甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA检测试剂盒MouseUlasensitivityi-iodothyronine,u-T3ELISAKit 96T/48T

硝呋烯腙盐酸盐  Nitrovin HCL,Difurazone  质量规格：>98%,BR 小鼠高敏状腺原酸(u-T3)ELISA试剂盒 ，英文名： u-T3 ELISA Kit

杜鹃素(标准品)  Farrerol  质量规格：HPLC≥98%,标准品 小鼠高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒 ，英文名： HMG1 ELISA Kit

对香豆酸;对羟基肉桂酸(标准品)  p-Coumaric acid  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠高迁移率族蛋白1(HMGB1)ELISA试剂盒 ，英文名： HMGB1 ELISA Kit

对叶百部碱（标准品）  Tuberstemonine  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒 ，英文名： HMGB-1 ELISA Kit

莪术醇(标准品)  Curcumol  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠高铁血红蛋白(MHB)ELISA试剂盒 ，英文名： MHB ELISA Kit

莪术二酮（标准品）  Curdione  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠高铁血红蛋白还原酶(MHBR)ELISA试剂盒 ，英文名： MHBR ELISA Kit

蒽醌(标准品)  Anthraquinone  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠睾酮(T)ELISA试剂盒 ，英文名： T ELISA Kit
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。