PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：牛棒杆菌PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

兔儿茶酚胺EAelisa试剂盒   兔儿茶酚胺EA试剂盒   规格型号：96T/48T   兔儿茶酚胺EA试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔儿茶酚胺EA试剂盒、兔儿茶酚胺EAelisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  4-Chlorodehydromethyltestosterone  2446-23-3  中文名：4-氯去氢甲基睾酮  分子式：C20H27ClO2  度：98.0%  关键词： 

兔儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒     4-Difluoromethoxy-3-hydroxybenzaldehyde  中文名：  分子式：C8H6F2O3  度：98.0%

兔儿茶酚胺(CA)ELISAKit     4-Chloro-6-iodoquinazoline  98556-31-1  中文名：  分子式：C8H4ClIN2  度：98.0%  关键词： 

兔蛋白激酶A   英文名称：   Rabbit Protein Kinase A   规格：   48T/96T   英文缩写：   PKA  4-Hydroxysapriparaquinone  中文名：  分子式：C20H26O4 

兔单核细胞趋化蛋白-1(rabbit MCP-1)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  4-Methylamino-3-nitrobenzoic acid  41263-74-5  中文名：  分子式：C8H8N2O4
Torososide A  中文名：  分子式：C38H32O15  度：%  兔子TH糖蛋白(THP)ELISA试剂盒  

Floribundone 1  中文名：  分子式：C32H22O10  度：99.0%  兔子S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒  

Rubianthraquinone  中文名：  分子式：C16H12O5  度：98.0%  兔子S100B蛋白(S-100B)ELISA试剂盒           

6-Hydroxyrubiadin  中文名：6-羟基甲基异茜草素  分子式：C15H10O5  度：97.5%  兔子α2抗纤溶酶elisa试剂盒   兔子α2抗纤溶酶试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子α2抗纤溶酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子α2抗纤溶酶试剂盒、兔子α2抗纤溶酶elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

1,5,15-Tri-O-methylmorindol  中文名：  分子式：C18H16O6  度：98.0%  兔增殖细胞核抗原elisa试剂盒   兔增殖细胞核抗原试剂盒   规格型号：96T/48T   兔增殖细胞核抗原试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔增殖细胞核抗原试剂盒、兔增殖细胞核抗原elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
牛棒杆菌PCR检测试剂盒供应苦玄参苷IV(标准品)  Picfeltarraenin IV  质量规格：HPLC≥98%,标准品 ELISAKitPP人胰多肽规格：48T/96T

瓜子金皂苷XXXI(对照品)  Polygalasaponin XXXI  质量规格：HPLC≥98%,标准品 小鼠甲状腺素抗体(TAb)ELISA试剂盒 ，英文名： TAb ELISA Kit

俾斯麦棕R  Bismarck Brown R  质量规格：BS 大鼠诱导型合成酶(iNOS)ELISA检测试剂盒Ratinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKIT 96T/48T

俾斯麦棕Y  Bismarck Brown Y  质量规格：BS 人雌激素(E)试剂盒 Human esogen,E ELISA Kit

偶氮氯膦I  Chlorophosphonazo Ⅰ  质量规格：AR,显色剂 RatSolubleprotein-100,S-100ELISAKit大鼠S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒规格：96T/48T

香豆素（标准品）  Coumarin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 IKB-α(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克

茜素  Alizarin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 Nasoniaviipennisvitellogenin,VtgELISA试剂盒蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原(vtg)ELISA试剂盒规格：96T/48T

姜黄素  Curcumin  质量规格：姜黄素类化合物>95%,姜黄素>75%,去甲氧基姜黄素<20% 小鼠甲状腺素(T4)ELISA试剂盒 ，英文名： T4 ELISA Kit

姜黄素（标准品）  Curcumin  质量规格：HPLC≥98%,标准品 大鼠合成酶(NOS)ELISA检测试剂盒Ratniicoxidesyhase,NOSELISAKit 96T/48T

姜黄素（高）  Curcumin  质量规格：HPLC≥97%,BR 人雌二醇受体(ER)试剂盒 Human Esadiol receptor,ER ELISA Kit
二苯并-15-冠5-醚(>95.0%(GC))  Dibenzo-15-crown 5-Ether  质量规格：>95.0%(GC) 小鼠组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)ELISA试剂盒 ，英文名： HDAC4 ELISA Kit

二苯并-21-冠7-醚(>96.0%(GC))  Dibenzo-21-crown 7-Ether  质量规格：>96.0%(GC) 小鼠组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)ELISA试剂盒 ，英文名： HDAC1 ELISA Kit

4'-甲酰苯并-15-冠-5-醚(>98.0%(GC))  4'-Formylbenzo-15-crown 5-Ether  质量规格：>98.0%(GC) 小鼠组蛋白脱乙酰基酶2(HDAC2)ELISA试剂盒 ，英文名： HDAC2 ELISA Kit

4'-甲酰苯并-18-冠-6-醚(>98.0%(GC))  4'-Formylbenzo-18-crown 6-Ether  质量规格：>98.0%(GC) 小鼠组蛋白脱乙酰基酶4(HDAC4)ELISA试剂盒 ，英文名： HDAC4 ELISA Kit

4,7,13,21,24-六氧杂-1,10-二氮杂双环[8,8,8]-二十六烷(>98.0%(GC)(T))  4,7,13,16,21,24-Hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane  质量规格：>98.0%(GC)(T) 小鼠组蛋白脱乙酰酶(HDAC1)ELISA试剂盒 ，英文名： HDAC1 ELISA Kit

2-(羟甲基)-12-冠4-醚(>95.0%(GC))  2-(Hydroxymethyl)-12-crown 4-Ether  质量规格：>95.0%(GC) 小鼠组酸丰富糖蛋白(HRG)ELISA试剂盒 ，英文名： HRG ELISA Kit

2-(羟甲基)-15-冠5-醚(>96.0%(GC))  2-(Hydroxymethyl)-15-crown 5-Ether  质量规格：>96.0%(GC) 小鼠组织蛋白酶A(CTSA)ELISA试剂盒 ，英文名： CTSA ELISA Kit

2-(羟甲基)-18-冠6-醚(>93.0%(GC))  2-(Hydroxymethyl)-18-crown 6-Ether  质量规格：>93.0%(GC) 小鼠组织蛋白酶B(CTSB)ELISA试剂盒 ，英文名： CTSB ELISA Kit

1,4,8,11-四氮杂环十四烷(>98.0%(T))  1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane  质量规格：>98.0%(T) 小鼠组织蛋白酶D(CTSD)ELISA试剂盒 ，英文名： CTSD ELISA Kit

1,4,7-三氮杂环壬烷三盐酸盐(>98.0%(N)(T))  1,4,7-Triazacyclononane Trihydrochloride  质量规格：>98.0%(N)(T) 小鼠组织蛋白酶G(CTSG)ELISA试剂盒 ，英文名： CTSG ELISA Kit
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。