PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：库蚊通用PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

兔趋化因子(rabbit Raes)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装     5-Fluorouracil  中文名：  分子式：C4H3FN2O2 

兔素F2aelisa试剂盒   兔素F2a试剂盒   规格型号：96T/48T   兔素F2a试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔素F2a试剂盒、兔素F2a elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  5-Aminoindazole  19335-11-6  中文名：5-氨基吲唑  分子式：C7H7N3 

兔素E2elisa试剂盒   兔素E2试剂盒   规格型号：96T/48T   兔素E2试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔素E2试剂盒、兔素E2 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  5-Aminofluorescein  中文名：5-氨基荧光素  分子式：C20H13NO5  度：98.0%

兔素E2(rabbit PGE2)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  5-Formyl-2-furylboronic acid  27329-70-0  中文名：  分子式：C5H5BO4 

兔素E1elisa试剂盒   兔素E1试剂盒   规格型号：96T/48T   兔素E1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔素E1试剂盒、兔素E1 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     5-Aminofluorescein  中文名：5-氨基荧光素  分子式：C20H13NO5
4,5-Di-O-caffeoylquinic acid methyl ester  中文名：4,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯  分子式：C26H26O12  度：97.5%  兔子抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)ELISAKit  

Methyl chlorogenate  中文名：绿原酸甲酯  分子式：C17H20O9  度：98.0%  兔子孕激素/孕(PROG)ELISAKit  

3,6'-Disinapoylsucrose  中文名：3,6'- 二芥子酰基蔗糖  分子式：C34H42O19  度：98.0%  兔子胶原酶II(CollagenaseII)ELISAKit   

Triethyl   中文名：柠檬酸三乙酯  分子式：C12H20O7  度：98.0%  大鼠巨噬细胞蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISAKit              

α-Lipoic acid  中文名：α-硫辛酸  分子式：C8H14O2S2  度：98.5%  兔子巨噬细胞炎性蛋白1αelisa试剂盒   兔子巨噬细胞炎性蛋白1α试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子巨噬细胞炎性蛋白1α试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子巨噬细胞炎性蛋白1α试剂盒、兔子巨噬细胞炎性蛋白1α elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
库蚊通用PCR检测试剂盒说明书米尔贝肟  Milbemycin oxime  质量规格：A3+A4>97% Mouseα-galactoyl,GalELISA试剂盒小鼠α半乳糖基抗原(α-Gal)ELISA试剂盒规格：96T/48T

伐地考昔  Valdecoxib  质量规格：>99%,BR 小鼠结蛋白(Des)ELISA试剂盒 ，英文名： Des ELISA Kit

胃膜素,胃粘蛋白,人胃泌素  Gastrin I,human   质量规格：>98%,BR 大鼠酸性0酸酶(PAP)ELISA检测试剂盒RatProstaticAcidPhosphatase,PAPELISAKit 96T/48T

UDPGA Na；尿苷-5'-二葡糖醛酸三钠盐  Uridine 5'-diphosphoglucuronic acid tri salt  质量规格：≥98%；美国进口 人促肾上皮质激素释放激素(CRH)试剂盒 human coicoopin releasing hormone,CRH ELISA Kit

替卡西林,替卡西林二钠  Ticarcillin di salt  质量规格：BR,二钠盐 RatSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISAKit大鼠可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒规格：96T/48T

替卡西林(标准品)  Ticarcillin di salt  质量规格：含量测定，二钠盐 HRP反应终止缓冲液100毫升

RGD肽  Arg-Gly-Asp   质量规格：>97%,integrin抑制剂 Mouseα-Glucosidase,a-GluELISA试剂盒小鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA试剂盒规格：96T/48T

肝素锂  Heparin lithium  质量规格：>150IU/MG,BR 小鼠接触蛋白1(CN1)ELISA试剂盒 ，英文名： CN1 ELISA Kit

促胰液素;胰泌素  Secretin Acetate  质量规格：>98%,BR 人β甘露糖苷酶(βManase)ELISA检测试剂盒Humanβmannosidase,βManaseELISAKit 96T/48T

麝香草酚  Thymol  质量规格：AR 大鼠紧张素原(aGT)试剂盒 Rat angiotensinogen,aGT ELISA Kit
反式玉米素  trans-Zeatin  质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养 大鼠舒缓激肽(BK)试剂盒 Rat bradykinin,BK ELISA Kit

氯亚铂酸钾   Dipotassium tetrachloroplatinate  质量规格：BR,铂含量 ≥46%,原始铂粉度＞99.95%  大鼠性因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISA检测试剂盒RatvonWillebrandFactor,vWFELISAKit 96T/48T

环黄芪醇  Cycloastragenol  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠性因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)试剂盒 Rat von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit

马兜铃酸A  Aristolochic acid A  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠性因子裂解酶(vWF-cp)试剂盒 Rat von Willebrand Factor cleaving protease,ADAMTS-13/vWF-cp ELISA Kit

羟基茜草素/红紫素（标准品）  Purpurin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠血红蛋白(Hb)试剂盒 Rat Hemoglobin,Hb ELISA Kit

酸枣仁皂苷D(标准品)  Jujuboside D  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠血红蛋白(HbCO)试剂盒 Rat Carboxyhemoglobin,HbCO ELISA Kit

伪原薯蓣皂苷  Pseduoprotodioscin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠血红素结合蛋白(HPX)试剂盒 Rat hemopexin,HPX ELISA Kit

氧化芍药苷,羟基芍药苷(标准品)  Oxypaeoniflorin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA检测试剂盒Rathemeoxygenase1,HO-1ELISAKit 96T/48T

3-异倒捻子素  3-isomangostin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠血红素氧合酶1(HO-1)试剂盒 Rat heme oxygenase 1,HO-1 ELISA Kit

柚皮苷二氢查尔酮  Naringin dihydrochalcone  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠血红素氧合酶2(HO-2)ELISA检测试剂盒Rathemeoxygenase2,HO-2ELISAKit 96T/48T
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。