PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：反刍兽埃立克体PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

兔子可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒              8-Azaguanine  中文名：8-氮杂鸟嘌呤  分子式：C4H4N6O 

兔子可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISAKit     8-Bromo-7-(but-2-yn-1-yl)-3-methyl-1H-purine-2,6(3H,7H)-dione  中文名：  分子式：C10H9BrN4O2  度：98.0%

兔子可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  1-(4-(3-Chloropropoxy)-3-methoxyphenyl)ethanone  58113-30-7  中文名：  分子式：C12H15ClO3  度：98.0%  关键词： 

兔子可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  1-(2-Amino-5-chlorophenyl)-1-(trifluoromethyl)-3-cyclopropyl-2-propyn-1-ol  中文名：  分子式：C13H11ClF3NO  度：98.0%

兔子可溶性P选择素(sP-selectin)ELISA试剂盒     8,14-Epoxyergosta-4,22-diene-3,6-dione  1265908-20-0  中文名：  分子式：C28H40O3  度：%  关键词：  ; 麦角甾烷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库
Iloperidone  中文名：伊潘立酮  分子式：C24H27FN2O4  度：98.0%  Cellulose,Microcrystalline   100g

4-[(4-Methylpiperazin-1-yl) methyl]benzoic acid dihydrochloride  中文名：甲磺酸伊马替尼  分子式：C13H20Cl2N2O2  度：98.0%  头孢苄   1g

4-(4-Aminophenyl)morpholin-3-one  中文名：  分子式：C10H12N2O2  度：98.0%  Cephalexinmonohydrate   5g              

N-(2,3-Epoxypropyl)phthalimide  中文名：  分子式：C11H9NO3  度：98.0%  晚期氧化蛋白产物 (AOPP)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

5-Chlorothiophene-2-carboxylic acid  中文名：  分子式：C5H3ClO2S  度：98.0%  转录因子 AP-1(AP-1)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装
反刍兽埃立克体PCR检测试剂盒直销蓝[pH指示剂]  Bromochlorophenol Blue  质量规格：pH指示剂 人特异性巨噬细胞武装因子(SMAF)ELISA检测试剂盒HumanSpecifieMacrophageArmingPaetot,SMAFELISAKit 96T/48T

乙基橙[pH指示剂]  Ethyl Orange  质量规格：pH指示剂 大鼠血清素受体2A/5-羟色胺受体2A(5-HT-2A)试剂盒 Rat Serotonin Receptor 2A/5-hydroxyyptamine Receptor 2A(5-HT-2A)ELISA Kit

4-乙氧基橘红盐酸盐(>95.0%(T))  4-Ethoxychrysoidine Hydrochloride  质量规格：>95.0%(T) 英文名称RatadiponectinELISAKit大鼠脂联素(adiponectin)ELISAKit规格：96T/48T

DAABD-Cl [=4-[2-(二甲氨基)乙氨基磺酰]-7-氯-2,1,3-苯并恶二唑  DAABD-Cl [=4-[2-(Dimethylamino)ethylaminosulfonyl]-7-chloro-2,1,3-benzoxadiazole]  质量规格：用于蛋白质组分析，用于高效液相色谱标记，荧光染料，用于质谱的衍生化试剂 高多糖/酚植物线粒体DNA萃取试剂盒10/20

2,3-萘二醛(>99.0%(GC))  2,3-Naphthalenedialdehyde  质量规格：>99.0%(GC) ELISAKitf-Hb人游离血红蛋白规格：48T/96T

DBD-F [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并恶二唑](>98.0%(HPLC))  DBD-F [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole]   质量规格：>98.0%(HPLC) 小鼠颗粒酶B(Gzms-B)ELISA试剂盒 ，英文名： Gzms-B ELISA Kit

N-(1-芘基)马来(>97.0%(HPLC))  N-(1-Pyrenyl)maleimide  质量规格：>97.0%(HPLC) 大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA检测试剂盒RatTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISAKit 96T/48T

爱维莫潘  Alvimopan  质量规格：删除；精神管制 人蛋白激酶C(PKC)试剂盒 Human protein kinase C,PKC ELISA Kit

3-磺炳基十四烷基二甲甜菜碱  Myristyl sulfobetaine  质量规格：>98.0%,BR RatphosphoProteinKinaseC,P-PKCELISAKit大鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒规格：96T/48T

3-磺炳基十六烷基二甲甜菜碱  3-(N,N-Dimethylpalmitylammonio)propanesulfonate(SHDAB)  质量规格：>98%,BR GMS15重组腺病毒载体繁殖超级化学感受态细菌5X100微升
固深红 GBC  Fast Garnet GBC Salt  质量规格：BS,90% 人解整合素样金属蛋白酶15(ADAM15)试剂盒 Human A Disiegrin And Metalloprotease 15,ADAM15 ELISA Kit

固红 3 GL  Fast Red 3 GL Salt  质量规格：BS 人解整合素样金属蛋白酶19(ADAM19)试剂盒 Human A Disiegrin And Metalloprotease 19,ADAM19 ELISA Kit

固红 KL盐  Fast Red KL Salt  质量规格：BS 人解整合素样金属蛋白酶33(ADAM33)试剂盒 Human A Disiegrin And Metalloprotease 33,ADAM33 ELISA Kit

固红B  Fast Red B Salt  质量规格：>90% 人解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)试剂盒 Human A Disiegrin And Metalloprotease 8,ADAM8 ELISA Kit

固红-萘磺酸 TR  Fast Red TR Salt 1,5-naphthalenedisulfonate salt  质量规格：≥90%(TLC) 人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)试剂盒 Human A Disiegrin And Metalloprotease 9,ADAM9 ELISA Kit

丽春红S  Ponceau S  质量规格：BS 人金葡菌肠(SE)ELISA检测试剂盒Humanstaphylococcusaureuseerotoxins,SEELISAKit 96T/48T

环丙贝特  Ciprofibrate  质量规格：>98%,BR 人金属硫蛋白(MT)ELISA检测试剂盒HumanMetallothionein,MTELISAKit 96T/48T

曙红Y(水溶)  Eosin Y water solution  质量规格：BS 人金属硫蛋白(MT)试剂盒 Human MT ELISA Kit

偶氮胭脂红B  Azocarmine B  质量规格：IND 人金属硫蛋白2(MT-2)试剂盒 Human MT-2 ELISA Kit

偶氮胭脂红G  Azocarmine G  质量规格：BS 人金属肽酶含血小板反应蛋白1(ADAMTS1)试剂盒 Human ADAMTS1 ELISA kit
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。