PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：粪肠球菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

恒河猴肾细胞;RM-3 人卵巢透明细胞癌细胞，ES-2细胞 ZR-75-30(癌细胞)乙酸纤维素薄膜1 O.D.

人细胞;LNCaP2--1,3-二甲基咪... 2-Chloro-4,5-dihydro-1,3-dimethyl... 101385-69-7 1G 通用试剂

ULBP1 Others Human 人 ULBP1 / RAET1 / N2DL1 人细胞裂解液 (阳性对照) L-2-安基丁醋 L-2-cMinobutyric ccid;L-2-cMino-n-butyric ccid;Butyrinq 292-23-8

恒河猴皮肤细胞;RM-S1N-(2-乙酰基)-亚基二乙酸二钠盐30/100ul/支

AMPK Others Human 人 AMPK (G1/B2/A2) Heteroimer 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 81012-87-5胞苷-5’-三1酸二钠盐Cytidine-5'-triphosphate diwo7ium salt dihydrate
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr异佛手柑内酯Isobergapten质量规格：HPLC≥98%，标准品

RGMA Others Human 人 RGMA 人细胞裂解液 (阳性对照) 异甘草苷（标准品）Isoliquiritin质量规格：HPLC≥98%，标准品

A375 人恶性色素瘤细胞雷马曲班Ramatroban;BAY u3405质量规格：>98%,BR

C6-EGFP-puro(慢病毒构建稳定株)大鼠脑细胞 C6-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) of rat brain glioma cells DMEM+10% FBS+2ug/ml puromycin异钩藤碱(标准品)Isorhynchophylline质量规格：HPLC≥98%，标准品

RSPO2 Protein Human 重组人 FTLS / RSPO2 蛋白 (186 Leu/Pro, Fc 标签)异荭草苷(标准品)luteolin-6-C-glucoside质量规格：HPLC≥98%，标准品
粪肠球菌PCR检测试剂盒说明书人间充质干细胞-肝脏裂解物HMSC-hp L超细高岭土(6000(3.5um))Kaolin(superfine)质量规格：6000(3.5um)

AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人细胞裂解液 (阳性对照) 高岭土(医药级)Kaolin质量规格：医药级

正常小鼠Leydig细胞;TM3硅藻土G(TLC专用)Kieselguhr G质量规格：TLC专用

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-D2 III型胶原酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL硅胶(AR)Silica gel质量规格：AR

EC109，人细胞 Human二氧化硅(99.99%,1-3mm)Silicon dioxide质量规格：99.99%,1-3mm
NCI-H23细胞，人非小细胞细胞 小鼠成纤维细胞,3T3NIH细胞 CM-R087大鼠软骨细胞完全培养基100mL5-扶乳清酸shēng huà shì jì容量：500毫克

RKO(人腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2水解酪蛋柏琼脂; M-H琼脂 Ccsqin xy7nolysctq cgcr; Muqllqr-Hinton cgcr;

Gibco 17005042 Keratinocyte-SFM (1X), Liquid(10724-011和37000015) 500ml尿嘧啶 Uracil (≥99%, cell culture tested) 66-22-8 25G 核酸衍生物

人肾系膜细胞cDNAHRMC cDNA2′-脱氧胞苷-5′-单嶙酸shēng huà shì jì容量：RT25克

CXCL16 Others Rat 大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 人细胞裂解液 (阳性对照) Foline-pxenol 50ml/100ml/250ml Sigma F9252
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。