【产品名称】: 絮状表皮癣菌PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Epidermophyton floccosumPCR
【货号】: BKP3646

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

絮状表皮癣菌PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

豚鼠皮肤细胞;GP-S1 牛肾细胞，MDBK细胞 PA12细胞，小鼠胚胎成纤维细胞(来自NIH3T3)DDM月桂酰基麦芽糖苷500毫克高，98%

人张氏肝细胞;Chang liver甜菜减言醋盐 Bqtcinq xy7nochloridq;Lycinq xy7nochloridq;Oxynqurinq xy7nochloridq;TriMqthyl glycocoll xy7nochloridq;1-Ccrboxy-N,N,N-triMqthylMqthcncMiniuM chloridq; 290-46-2

JAM2 Others Mouse 小鼠 JAM2 / CD322 / VE-JAM 人细胞裂解液 (阳性对照) 甲基绿 Methyl Green (Dye content, ≥85%) 7114-3-6 1G 染色剂

肺泡上皮细胞培养基AEpiCM乳糖复发酵管培养基shēng huà shì jì容量：2～8℃25毫升

MET Others Canine 狗 c-MET / HGFR 人细胞裂解液 (阳性对照) 2.5-双(4-联本基)-1.3.4-噁二唑NA
原代心肌细胞特制基础无血清培养基Many types of cells包装：500/100ml盐酸索他洛尔Sotalol HCl质量规格：>98%,BR

EDAR Others Rat 大鼠 EDAR 人细胞裂解液 (阳性对照) H-89(PKA抑制剂)H-89 2HCl质量规格：>98%,10mg/ml,进分

大鼠胎儿表皮角质形成层细胞完全培养基 100mL夫西地酸Fusidine质量规格：>97%,BR

HaCaT人永生化表皮细胞 HaCaT immortalized human epidermal cells DMEM+10% FBS夫西地酸(标准品)Fusidine质量规格：HPLC≥98%,标准品

IFNA4 Protein Rat 重组大鼠 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 蛋白 (Fc 标签)3--L-酪氨酸3-Iodo-L-tyrosine质量规格：>98%,BR
人肝脏间充质干细胞HMSC-hp半乳糖（标准品）D-GALACTOSE 1-[2-(2-AZIDOETHOXY)ETHOXYETHYL]-2,3,4,6-TETRA-O-ACETATE质量规格：供检查用

TLK1 Others Human 人 TLK1 / PKU-beta 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 富马酸氯马斯汀（标准品）Clemastine fumarate质量规格：HPLC含量测定

VERO细胞衍生株;SVP富马酸氯马斯汀Clemastine fumarate质量规格：>98%,BR

CGM1细胞，EB病毒转化的B细胞 人结直肠腺癌细胞,LS174T细胞 CM-R029大鼠肠平滑肌细胞完全培养基100mL富马酸酮替芬（标准品）Ketotifen fumarate质量规格：含量测定

正常大鼠肾细胞;NRK-52E己内酰胺（标准品）2-Oxohexamethylenimine质量规格：供检查用
絮状表皮癣菌PCR检测试剂盒说明书杂交瘤(B类);Z1510C6D10F4G6雌激素酮 β-D-葡萄糖苷酸钠盐质量规格：美国进口Estrone β-D-Glucuronide  Salt

EM2 Others Human 人 EM2 人细胞裂解液 (阳性对照) ?8,9-脱氢雌激素酮 3-硫酸钠盐质量规格：美国进口?8,9-Dehydro Estrone 3-Sulfate  Salt

人羊膜上皮细胞雌激素酮-d4质量规格：美国进口Estrone-d4

NA Others H9N2 甲型 H9N2 (A/Chicken/Hong Kong/G9/97) 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 克林霉素质量规格：美国进口Clindamycin

人胚;MRC-54-羟基氨苯蝶啶质量规格：美国进口4-Hydroxy Triamterene
PCR检测试剂盒

絮状表皮癣菌PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。