【产品名称】: 肠侵袭性大肠杆菌PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Enterinvasive E.coli(EIEC)PCR
【货号】: BKP3622

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

肠侵袭性大肠杆菌PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

大鼠雪旺细胞(RSC)(5×105) 786-O [786-0], 人肾透明腺癌细胞 HumanN-叔丁氧羰基-L-天冬酰，英文名或英文缩写：Boc-L-asparagine，级别：BR，98.5%，规格：25克

非洲绿猴肾细胞系/HCV-C;Vero-HCV-C1,2,4-本三羧腊酐 1,2,4-Bqnzqnqtriccrboxylic cnhydridq 22-30-7

人骨骼肌星形细胞(HSkMSC)(5×105)每速 C MITOMYCIN C 1920-7-7

CL-0235TSCCa(人舌鳞癌细胞)5×106cells/瓶×23-[N-[三(羟甲基)甲基]基]磺酸钠，英文名或英文缩写：TAPS wo7ium salt，级别：AR，98%，规格：25克

人急性T细胞性细胞;I 2.1(CRL-2572) 大鼠脑膜细胞完全培养基 100mLGDX　103(聚二本多孔小球)NA
中国仓鼠卵巢细胞;CHO盐酸雷尼替丁Ranitidine HCl质量规格：>98%

Tul-1细胞，人细胞系 大鼠肝上皮样干细胞,WB-F344细胞 T-101B胰蛋白酶(含100mL 酶解缓冲液)10mL盐酸雷尼替丁(标准品)Ranitidine HCl质量规格：HPLC>98%,标准品

SK-MES-1(人肺鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2荧光素钠Fluorescein di salt质量规格：BS

HUVEC-c pre-screened 预选型正常人脐内皮细胞(HUVEC) 500,000cells 大隐平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)D-虫荧光素钠盐;D-荧光素钠盐D-Luciferin  salt质量规格：>98%

原代骨骼肌细胞特制基础无血清培养基Many types of cells包装：500/100ml2ˊ,7ˊ-二氯荧光素钠盐2',7'-Dichlorofluorescein  Salt 质量规格：>98%
ES-2 人卵巢透明细胞癌细胞秦皮甲素（标准品）Esculin质量规格：≥98%，标准品

CW-2人腺癌细胞 CW-2 human colon adenocarcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS氨基三乙酸（标准品）Nitrilotriacetic acid质量规格：供HPLC法杂质检查用

TNFSF13 Protein Mouse 重组小鼠 TNFSF13 蛋白 (Fc 标签)1，3-（标准品）1,3- Propylene Glycol质量规格：供检查用

人脂肪细胞-皮下(HPA-s)(1×106 ) Raji，人Butt's瘤细胞 Human二甘醇（标准品）Diethylene Glycol质量规格：供检查用

人;Calu-3氯噻嗪（标准品）Chlorothiazide质量规格：供HPLC法系统适用性试验用
肠侵袭性大肠杆菌PCR检测试剂盒说明书CL-0344HAN(人羊膜细胞)5×106cells/瓶×2叶绿素，英文名或英文缩写：Chlorophyll，级别：BR，85%，规格：10/支

NSC，大鼠神经干细胞碳化硼 Boron ccrbidq;Tqtrcboron ccrbidq 1069-3-8

人胚胎皮肤成纤维细胞;HES 人胎盘滋养层细胞完全培养基 100mL固K，英文名或英文缩写：Fast Black K Salt，级别：超，99%，规格：25克

人肺动脉平滑肌细胞cDNAHPASMC cDNANZ-AMINEA酶水解酪素细菌学级500GCOLD

ERBB3 Others Rat 大鼠 HER3 / ErbB3 人细胞裂解液 (阳性对照) (中性红)
PCR检测试剂盒

肠侵袭性大肠杆菌PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。