PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：肠道病毒组PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

EB病毒转化的绒猴细胞;B95-8ISOPROPYLALCOHOL异生物技术级20LRT

CD40LG Others Rat 大鼠 CD40L / CD154 / TNFSF5 人细胞裂解液 (阳性对照) 锑标准溶液 cntimony

小肠隐窝上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)Pancreatin胰酵25克10万u/g

MEG-01细胞，人成巨核细胞细胞 正常小鼠Leydig细胞,TM3细胞 间充质干细胞生长添加物MSCGSBOC-L-本酸10克RT

NCI-H23(人非小细胞细胞) 5×106cells/瓶×2(逆转录酶)
长白山猪胚胎皮肤成纤维样细胞;201184去甲乌药碱盐酸盐Higenamine hydrochloride质量规格：>98%,BR

JEC, 人子宫内膜腺癌细胞系二氢欧山芹素 (标准品)Columbianetin 质量规格：HPLC≥98%，标准品

人肾上腺皮质癌细胞;SW-13 大鼠胰腺上皮细胞完全培养基 100mL异泽兰黄素（标准品）Eupatilin质量规格：HPLC≥98%，标准品

肾动脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)利莫那班羧酸Rimonabant carboxylic acid质量规格：>98%

MAP4K2 Others Human 人 MAP4K2 / GC Kinase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 玉米黄质Zeaxanthin质量规格：>40%
肠道病毒组PCR检测试剂盒说明书人肾透明细胞腺癌细胞;786-O [786-0] 大鼠神经胶质细胞完全培养基 100mL2-氯-1,10-邻二氮杂菲(>98.0%(HPLC)(T))2-Chloro-1,10-phenanthroline质量规格：>98.0%(HPLC)(T)

P19 小鼠4,7-二甲基-1,10-邻二氮杂菲(>98.0%(T))4,7-Dimethyl-1,10-phenanthroline质量规格：>98.0%(T)

PLTP Others Human 人 PLTP 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-苯氧苄醇(98%)3-Phenoxybenzyl alcohol质量规格：0.98

虹膜色素上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)果胶(半乳糖醛酸(干基计)≥74.0 %)Pectin质量规格：半乳糖醛酸(干基计)≥74.0 %

LTBR Others Rat 大鼠 LTBR / TNFRSF3 人细胞裂解液 (阳性对照) 1酸三丁酯(AR,99%)Tributyl phosphate质量规格：AR,99%
EB病毒转化的人B细胞;KMY0904 细胞完全培养基 100mLMES-SDSBUFFER,20XMES-SDS 电泳缓冲液超级500MLRT

青霉素/链霉素溶液P/S录铂醋铵 cmmonium chloroplctinctq 16919-28-7

VEGFA Others Canine 狗 VEGF / VEGFA 人细胞裂解液 (阳性对照) 1,2:5,6-O-双异炳叉-α-D-葡萄糖 Diccqtonq-D-glucosq 1928/2/2

人急性T细胞细胞;Jurkat, Clone E6-1DL-苹果酸钙500克

H7402细胞，人细胞 小鼠艾氏腹水癌细胞,EAC细胞 非洲绿猴肾细胞;VERO-76Boricacid 250g/500g/1kg Amresco 0588
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。