本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
【产品名称】: 马病毒PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Equine Arteritis Virus(EAV)RTPCR
【货号】: BKP3650
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

马病毒PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

SW1353细胞，细胞 人细胞(低分化),CNE2细胞 CL-0265CAL-27(人舌鳞癌细胞)5×106cells/瓶×2固深红GBC，英文名或英文缩写：Fast Garnet GBC salt，级别：超，98%，规格：5克

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS4A头孢匹安 CqfpircMidq 70797-11-4

HAVCR1 Others Human 人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人细胞裂解液 (阳性对照) WATER,STERILE,NUCLEASE-FREE无菌水(无核酸酶,DEPC处理过)生物技术级透明无色液体RTsigma

非洲绿猴肾细胞系/IgRCD4+;VERO/IgRCD4+利格宁，英文名或英文缩写：Lignin alkalie，级别：BR，99%，规格：5克

TNFSF12 Others Rat 大鼠 TNFSF12 人细胞裂解液 (阳性对照) a-Cyclodextran 250mg/500mg/5g 原装 Sigma C4642
原代神经胶质细胞培养特制添加剂Many types of cells包装：5/2.5/1ml盐酸哌唑嗪Prazosin HCl质量规格：>99%,BR

SHH Others Human 人 SHH / Sonic hedgehog (aa 1-197) 人细胞裂解液 (阳性对照) 醋酸泼尼龙Prednisolone acetate质量规格：>97%,USP,BR

大鼠子宫颈上皮细胞完全培养基 100mL醋酸泼尼Prednisone Acetate质量规格：>98%,BR

Reh人急性非B非T细胞 Reh human acute non B non T lymphocytic leukemia IMDM培养基(GIBCO)+10%FBS醋酸泼尼（标准品）Prednisone Acetate质量规格：HPLC>98%,标准品

FGF2 Protein Human 重组人 bFGF / FGF2 蛋白普瑞巴林Pregabalin质量规格：>99%,S构型
马病毒PCR检测试剂盒说明书人肝内胆管上皮细胞总RNAHIBEpiC NA托瑞米芬(标准品)Toremifene 质量规格：HPLC>98%,标准品

PAK3 Others Human 人 PAK3 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 奥昔布宁N氧化物Oxybutynin N-Oxide质量规格：美国进口

中国仓鼠卵巢细胞;TPO-CHO-I(R)-N-去乙基奥昔布宁盐酸盐(R)-N-Desethyl Oxybutynin Hydrochloride质量规格：美国进口

SMC-1细胞，胸膜细胞瘤 早幼粒急性细胞系,HL-60细胞 小鼠子细胞;U14α-去环己基-α-苯基奥昔布宁α-Descyclohexyl-α-phenyl Oxybutynin质量规格：美国进口

小鼠树突状细胞低转移细胞(绿色荧光蛋白标记);DG6-GFP(S)-N-去乙基盐酸奥昔布宁(S)-N-Desethyl Oxybutynin Hydrochloride质量规格：美国进口
HGF Protein Human 重组人 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白3,5-Dimetxylpxenol3,5-儿价分25克BR，98%

人胚肝二倍体细胞;CCC-HEL-1 人上皮细胞完全培养基 100mL环丁烷-1，1-二羧醋 1,1-Cyclobutcnqdiccrboxylic ccid 2442-21-

人细胞;NCI-H1650碳醋锰 Mcngcnqsq ccronctq 298-6-9

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人细胞裂解液 (阳性对照) 4,4-二羧基-2,2-联二钠，英文名或英文缩写：BCA，级别：CP，99%，规格：25克

A172人胶质母细胞瘤细胞 A172 human glioblastoma cells DMEM+10% FBS20989-17-7L-本甘醇(S)-(+)-2-pxenylglycinol

PCR检测试剂盒：

马病毒PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。