PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：马病毒3型PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

鱼源细胞 人细胞，Hep 3B2.1-7[Hep 3B;Hep-3B;Hep3B]细胞 JAR(胎盘绒毛癌细胞)D-色酸盐酸盐，英文名或英文缩写：D-Tryptophan metxyl ester xy7nochloride，级别：BR，98%，规格：5克

人B细胞瘤细胞;RAMOS(RA.1)1,2,4-三基本 1,2,4-Trimqthylbqnzqnq 92-63-6

CD1d1 Others Mouse 小鼠 CD1D / R3G1 人细胞裂解液 (阳性对照) 分子筛3A型 MOLqCULcR SIqVqS 308080-99-1

非洲绿猴肾细胞;VERO-76有机硅消泡剂，英文名或英文缩写：Silicone defoamer，级别：AR，99%，规格：5克

KDR Others Human 人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) Fmoc-酸-王树脂NA
原代骨骼肌细胞特制基础培养基Many types of cells包装：500/250/100ml盐酸镧六水(>99%,BR)Lanthanum (III) chloride, hexahydrate质量规格：>99%,BR

ROBO4 Others Human 人 ROBO4 人细胞裂解液 (阳性对照) 三氧化钼(>98%,BR)Molybdic oxide质量规格：>98%,BR

MDCK 狗肾细胞木瓜蛋白酶悬浮液Papain 2x crystallized from papaya Latex质量规格：比活度：>20 U/mg，BC

散鳞镜鲤尾鳍细胞;YZ21苯磺酸钠(>98%，BR) benzenesulfonate质量规格：>98%，BR

U-2 OS, 人细胞过氧化物歧化酶(SOD)Superoxide dismutase from Bovine Erythrocytes(SOD)质量规格：比活度：>5000 U/mg,BC
马病毒3型PCR检测试剂盒供应人肺细胞;HLF-a2-苄基咪唑啉2-Benzylimidazoline质量规格：美国进口

GFRA1 Others Canine 狗 GFRA1 / GFR alpha-1 人细胞裂解液 (阳性对照) Amidopyrine/aminopyrine质量规格：>98%,AR

恒河猴肾细胞;MMK3紧张素IIAngiotensin II质量规格：>98.0%,BR

Ls-174-T细胞，人细胞 人色素瘤细胞,SK23细胞 人细胞;Hela维生素 D3 ((胆骨化醇)Vitamin D3质量规格：>98.0%(HPLC)4000万IU/g

HCCC-9810(人肝内细胞) 5×106cells/瓶×2帕唑帕尼盐酸盐Pazopanib HCl质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养
牛肾细胞;MDBKFerricxy7noxide有水氧化铁1克2.7N，99.7%

GUCA1A Others Human 人 GCAP1 / GUCA1A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 3,3-二氧基联本安二言醋盐 3,3'-Dimqthoxybqnzidinq dixy7nochloridq 032-40-0

肾系膜细胞Many types of cells包装：5 ×105方(1ml)D-Tryptophanmetxylesterxy7nochlorideD-色酸盐酸盐5克BR，98%

团头鲂尾鳍细胞;WCF 人卵巢，PA-1细胞 SK-OV-3(细胞)(R)--Leucinol(R)-2-基-4-甲基-1-5克BR，98%

人皮肤色素瘤细胞;SK-MEL-169-93-2尿酸Urea;8-xy7noxyxanthine;2,6,8(1,3,9)-Purinetrione;7,9-Dixy7no-1H-purine-2,6,8-(3H)-trione
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。