PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：马病毒PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

L6565细胞，小鼠L6565克隆细胞系 人细胞,MKN-28细胞 猴源细胞录化铟shēng huà shì jì容量：25克

杂交瘤(B类);Z1510A2G6A2C7甘酸钙 Calcium Glycinate,≥99.0% 35947-07-0 100G 通用试剂

TIMP1 Others Human 人 TIMP-1 / TIMP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 鳞化铁 IRON PHOSPHIDq 1310-43-6

二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞;CHO/dhFr-N-甲基-D-葡糖胺shēng huà shì jì容量：100克

人肝星形细胞 (HHSteC)( 5×105 )1977-6-5赤霉素(+4℃)Gibberellic acid
组织源性原代细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)/1ml盐酸苯海拉明-d6Diphenhydramine-d6 Hydrochloride质量规格：美国进口

CD2 Others Canine 狗 CD2 人细胞裂解液 (阳性对照) 普仑司特半水合物Pranlukast hemihydrate质量规格：美国进口

大鼠纤维母细胞;1/EJ 1-1(R)-美托洛尔(R)-Metoprolol质量规格：美国进口

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-C 细胞，HO-8910细胞 CHO/dhFr-细胞，中国仓鼠肾细胞(二氢叶酸还原酶缺陷型)α-羟基美托洛尔(非对映)α-Hydroxy Metoprolol(Mixture of Diastereomers)质量规格：美国进口

人胚胎膀胱组织来源细胞;CCC-HB-2(S)-美托洛尔(S)-Metoprolol质量规格：美国进口
马病毒PCR检测试剂盒直销人肺动脉内皮细胞RNAHPASMC miRNA5 μg达沙替尼（无水）（标准品）Dasatinib质量规格：HPLC>99%,标准品

MTDH Others Human 人 MTDH / lyric / metadherin 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 阿齐沙坦Azilsartan质量规格：>99%,BR

猪细胞;ST阿齐沙坦(标准品)Azilsartan质量规格：HPLC>98%,标准品

U251细胞，细胞 鼠成纤维细胞系,NIH/3T3细胞 人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7伊维菌素(标准品)Ivermectin质量规格：分析标准品

KM小鼠未分化神经瘤株;B22SB431542,SB-431542SB-431542质量规格：>98%TGF-β抑制剂
TIE1 Others Human 人 Tie1 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-基异25克

人细胞;SF7632-溴-6-肖基本 2-Bromo-6-nitnotoluqnq 2289-32-2

IL6ST Others Cynomolgus 食蟹猴 IL6ST / gp130 人细胞裂解液 (阳性对照) Fmoc-L-羟脯酸25克

CM-H122人神经星形胶质细胞完全培养基100mL甲基百里酚蓝1克

(+)9811细胞，人细胞 人细胞,SP20细胞 人胚胎眼巩膜成纤维细胞;HFSFβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型辅酶二钠盐(+4℃)NA
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。