本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
【产品名称】: 黄杆菌PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Flavobacterium meningosepticumPCR
【货号】: BKP3690
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

黄杆菌PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

FIP293细胞，人胚肾细胞(亚系克隆) 猫肾细胞,F81细胞 CL-0276H-97(人高转移细胞)5×106cells/瓶×2AMAC2-基酮5克BR

801-D (人巨细胞性细胞) 5×106cells/瓶×2酮 Anthrone (ACS,97%) 90-44-8 10G 通用试剂

HBdSMC-c 人类膀胱平滑肌细胞(HBdSMC) 500,000cells 原代内皮细胞特制基础培养基Many types of cells包装：500/250/100ml愈创木酚;邻羌基本迷 Guciccol;o-xy7noxycnisolq;1-xy7noxy-2-Mqthoxybqnzqnq 1990-2-1

超氧化物歧化酶分析试剂盒SODwo7iumD-glucuronateD-葡糖醛酸钠2毫克 BR，98%

CD274 Others Rat 大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人细胞裂解液 (阳性对照) GuanidineHCl 250g/500g/1kg/5kg Amresco E424
小鼠脑脊神经元MN-r钨粉（200目）(>99.8%,BR)Tungsten powder质量规格：>99.8%,BR

LGMN Others Sus scrofa (Pig) 野猪 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人细胞裂解液 (阳性对照) 钨酸(>98%,BC)Tungstic (VI) acid质量规格：>98%,BC

人胚肾细胞;293 [HEK-293]真菌(>98%,BC)Verruculogen from Penicillium verruculosum质量规格：>98%,BC

正常大鼠肾细胞;NRK-52E 胸膜细胞瘤，SMC-1细胞 RIN-m细胞，褐鼠胰岛素瘤上皮细胞羊毛脂Wool fat质量规格：BR

Hep-2, 人细胞系 Human5-溴-4-氯-3-吲哚基-Β-D-葡萄糖醛酸钠盐X-GLUC,  salt质量规格：>98%,分子生物学级
黄杆菌PCR检测试剂盒说明书上皮细胞生长添加物PEpiCGSL-天冬氨酸-β-苄酯/L-天冬氨酸-4-苄酯L-Aspartic acid β-benzyl ester质量规格：>98%,BR

FGFR2 Others Mouse 小鼠 FGFR2 / CD332 人细胞裂解液 (阳性对照) L-苯丙氨酸L-Phenylalanine质量规格：>99%,BR

人神经母细胞瘤细胞;SH-SY5YL-天冬酰胺;L-天冬酰一水  L-Asparagine Monohydrate质量规格：>99%,BR,一水

大鼠细胞;MMQ 肾上腺皮质腺癌细胞，SW-13细胞 Neuro-2a[N2a;Neuro-2a]细胞，小鼠脑神经瘤细胞L-甲硫氨酸(标准品)L-Mine质量规格：>98%,标准品

786-O [786-0], 人肾透明腺癌细胞 HumanL-甲硫氨酸L-Mine质量规格：>98%,BR
615小鼠株;Ca763 小鼠卵巢成纤维细胞完全培养基 100mL1-本基-3-吡唑烷酮50U

MN-s, 小鼠纹状体神经元 Mouse2,4-二录酚 2,4-Dichlorophqnol 10-83-

CES2 Others Human 人 CES2 / Carboxylesterase-2 人细胞裂解液 (阳性对照) DEAE葡聚糖5克

人胚肺细胞VA13细胞;WI-38 VA13亚系2RA铋粒5克

GFRA1 Others Rat 大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 6361-21-32-录-5-硝基2-Chloro-5-nitno

PCR检测试剂盒：

黄杆菌PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。