PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：紧密着色霉PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) 人纤维，HT-1080细胞 SW 900 [SW-900; SW900](人细胞)大肠杆菌显色培养基13.5×15cm/张

人脑星形胶质母细胞瘤;U-87 MG [U87MG;U87 MG]美满霉素 Minocycline hydrochloride,98% 13614-98-7 100MG 通用试剂

PDPN Others Human 人 PDPN / Podoplanin 人细胞裂解液 (阳性对照) 羌安 xy7noXYLcMINq 7803-49-8

扁桃体上皮细胞生长添加物TEpiCGS血清羊抗人IgA1公斤RT

EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人细胞裂解液 (阳性对照) 26386-88-9叠氮1酸二本酯 97%Dipxenylphosphoryl azide
小鼠海马星形胶质细胞MA-h酸性红88 Acid Red 88质量规格：AR,进分

CDKL2 Others Human 人 CDKL2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 酸性红183Acid Red 183质量规格：AR,原装进口

293来源病毒包装细胞;ΦA酸性红9Acid Red 9质量规格：AR,进分

MDCK细胞，狗肾细胞 人细胞,RKO细胞 CM-H101新生儿细胞完全培养基100mL孔雀石绿Malachite green质量规格：BS

大鼠脑细胞;C6灿烂绿,亮绿Brilliant green质量规格：BS
紧密着色霉PCR检测试剂盒说明书平滑肌细胞培养基SMCM-sf-prf5-甲基尿苷5-Methyluridine质量规格：>99%,BR

HDAC3 Others Human 人 HDAC3 / Histone deacetylase 3 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) D-核糖(标准品)D-(-)-Ribose质量规格：>99%,标准品

转化细胞D-核糖D-(-)-Ribose质量规格：>98%,BR

P3X63Ag8细胞，细胞 人十二指肠腺癌细胞,HuTu-80细胞 CM-H029人脐带单核细胞完全培养基100mL二硫苏糖醇(DTT)DL-Dithiothreitol质量规格：>99%,分子生物学级

大鼠胚胎心肌细胞;H9c2(2-1)D(+)-二糖D(+)-Turanose质量规格：>98%,BR
VWC2 Others Human 人 VWC2 / Brorin 人细胞裂解液 (阳性对照) 2′-脱氧腺苷250克

人间充质干细胞-脂肪季务四醇鳞醋酯 2,6,7-Trioxc-1-phosphcbicyclo2.2.2octcnq-4-mqthcnol, 1-oxidq 2301-78-0

AKT1 Others Human 人 AKT1 / PKB / PKBα 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 二硫代苏糖醇100克

人角膜细胞RNAHK miRNA5 μg四化1克

7721细胞，7721细胞 人细胞(结转移),NCI-H292细胞 人间充质干细胞-脂肪98103-87-82-本基-1-;β-本;2-本;β-羟基异本;β-甲基本基乙醇2-pxenyl-1-propanol;2-pxenylpropyl alcohol;β-xy7noxyisopropylbenzene;β-metxylpxenetxyl alcohol;β-xy7noxycuMene;xy7notropic alcohol
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。