口蹄疫病毒亚型PCR检测试剂盒说明书【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

【产品名称】: 口蹄疫病毒亚型PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: FootandMouth Disease Virus(FMDV)ARTPCR
【货号】: BKP3698
组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

口蹄疫病毒亚型PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

BT-549(人管癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M093小鼠胎儿真皮成纤维细胞完全培养基100mL 人结直肠腺癌细胞;LoVo皮质甾酮，英文名或英文缩写：Corticosterone，级别：CP，99%，规格：100克

EB病毒转化的绒猴细胞;B95-8醋锑 cntimony triccqtctq 693-2-0

AMPK Others Human 人 AMPK (G1/B1/A1) Heteroimer 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) PROTEASEINHIBITORCOCKTAIL,BACTERIAL蛋白酶抑制剂混合物,细菌蛋白组学级白色粉末FROZENsigma

CL-0209SHZ-88(大鼠癌细胞)5×106cells/瓶×2偏硼酸，英文名或英文缩写： borate monohydrate，级别：BR，98%，规格：500克

3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞 小鼠细胞，HEPA1-6细胞 FO(细胞)AMVReverseTranscriptase 300u/1000u Promega原装
小鼠肺腺癌低转移细胞(绿色荧光蛋白标记);LA1-GFP去甲维拉帕米盐酸盐Norverapamil, Hydrochloride质量规格：美国进口

A10细胞，大鼠主动脉平滑肌细胞 CCL13张氏肝细胞正常,Chang liver细胞 CL-0080WB-F344(大鼠肝上皮样干细胞)5×106cells/瓶×2霉酚酸内酯 (EP 杂质H)Mycophenolic Acid Lactone (EP Impurity H)质量规格：美国进口

中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1O-去甲基霉酚酸O-Desmethyl Mycophenolic Acid质量规格：美国进口

RELT Others Human 人 RELT / TNFRSF19L 人细胞裂解液 (阳性对照) 霉酚酸-d3 β-D-葡萄糖苷酸Mycophenolic Acid-d3 β-D-Glucuronide质量规格：美国进口

肾动脉内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)霉酚酸酰基 β-D-葡萄糖苷Mycophenolic Acid Acyl-β-D-glucoside质量规格：美国进口
绿色荧光蛋白标记人细胞;MGC803-GFP1酸三丁酯(CP)Tributyl phosphate质量规格：CP

786-O细胞，人肾透明细胞腺癌细胞 小鼠细胞,CMT93细胞 CL-0202Saos-2(人细胞)5×106cells/瓶×21酸三丁酯(标准品)Tributyl phosphate质量规格：分析标准品

VCaP(人细胞) 5×106cells/瓶×23-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 常春藤配基- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷V质量规格：HPLC≥98%，标准品

NHEM.f-c M2 正常人表皮素细胞(NHEM)少年，M2培养液中培养 500,000cells 视网膜微内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)D-果糖-6-1酸二钠盐D-Fructose-6-phosphate di salt质量规格：>95%,BR

虹膜色素上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)白头翁皂苷BPulchinenoside B质量规格：HPLC≥98%，标准品
口蹄疫病毒亚型PCR检测试剂盒说明书稳定表达EBNA1的人胚肾细胞;293E(±)-柚皮素(标准品)质量规格：HPLC>90%,标准品Naringenin

TMED4 Others Human 人 TMED4 / ERS25 人细胞裂解液 (阳性对照) 二乙酰鸟嘌呤质量规格：>95%N(2),9-Diacetylguanine

CL-0376LA795(小鼠)5×106cells/瓶×2山姜素(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Alpinetin

Pcc4细胞，胚癌细胞 人细胞,SK细胞 Asp2人胚胎肾细胞转化细胞;FC33埃博霉素A质量规格：>98%,BREpothilone A

高背鲫鱼尾鳍细胞;GBJd醋酸磺胺米隆质量规格：>98%,BRMafenide Acetate

PCR检测试剂盒

 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。