本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
【产品名称】: 雪腐镰刀菌PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Fusarium nivalePCR
【货号】: BKP3714
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

雪腐镰刀菌PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7 大鼠细胞完全培养基 100mLAcrylylchloride录化酸25克BR，98%

DH82 狗肾恶性症细胞2-基;亏哪啶;邻基;α-基;2-基氮杂 2-Mqthylinoneolinq;inonecldinq;α-Mqthylinoneolinq;Chincldinq

KLK4 Others Human 人 KLK-4 / Kallikrein-4 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-MU4-甲基伞形酮100克试剂级，92%

SV40转染人成骨细胞;hFOB 1.19BORICACID硼酸蛋白组学级500GRT

TH Others Mouse 小鼠 TH / Tyrosine Hydroxylase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 1,3-二甲基巴比土酸NA
稳定表达EBNA1的人胚肾细胞;293E外消旋5-羟甲基去异丙基托特罗定-d6rac 5-Hydroxymethyl Desisopropyl Tolterodine-d6质量规格：美国进口

CD38 Others Rat 大鼠 SCARB3 人细胞裂解液 (阳性对照) 外消旋去异丙基托特罗定rac Didesisopropyl Tolterodine质量规格：美国进口

人肾管状上皮细胞完全培养基 100mL外消旋5-羟甲基托特罗定rac 5-Hydroxymethyl Tolterodine质量规格：美国进口

B16F1细胞，小鼠色素瘤细胞 MRC-5(胚肺细胞) Asp2人胚胎肾细胞转化细胞;FC33外消旋5-羧基去异丙基托特罗定rac 5-Carboxy Desisopropyl Tolterodine质量规格：美国进口

CCL6 Protein Mouse 重组小鼠 CCL6 / C-C motif ligand 6 蛋白 (His 标签)S-(-)-托特罗定S-(-)-Tolterodine质量规格：美国进口
雪腐镰刀菌PCR检测试剂盒说明书猫星形脑胶质细胞;PG-4(S+L-)苯并[a]蒽(>98.0%(GC))Benz[a]anthracene质量规格：>98.0%(GC)

CDCP1 Others Human 人 CDCP1 / CD318 人细胞裂解液 (阳性对照) 1H-环五[l]菲(>95.0%(GC))1H-Cyclopenta[l]phenanthrene质量规格：>95.0%(GC)

人平滑肌细胞完全培养基 100mL9-氨基喜树碱9-Aminocamptothecin质量规格：美国进口

A-431细胞，人表皮癌细胞 嗜血杆菌 BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.1(R)-7-乙基喜树碱(R)-7-Ethyl Camptothecin质量规格：美国进口

CCL18 Protein Human 重组人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白 (His 标签)7-乙基-喜树碱-d37-Ethyl-d3-camptothecin质量规格：美国进口
人平滑肌细胞cDNAHPSMC cDNA乳糖-明胶培养基10克RT

EED Others Human 人 EED / Embryonic Ectoderm Developme 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 放现菌速 D cCTINOMYCIND 20-6-0

杂交瘤(B类);C3110D2B2化乙酰胆碱 (培养... Acetylcholine chloride (cell culture t... 60-31-1 25G 核酸衍生物

BT549细胞，管癌细胞 人细胞,M4e细胞 大鼠胚胎心肌细胞;H9c2(2-1)DEXTRAN葡聚糖(分子量10000)试剂级白色粉末RTsigma

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-A4(叶酸

PCR检测试剂盒：

雪腐镰刀菌PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。