PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：禾谷镰刀菌PCR检测试剂盒价格使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

JAM3 Others Human 人 JAM3 / JAM-C 人细胞裂解液 (阳性对照) Glycogenfromoyster糖元二型1克超，98%

人上皮样细胞;BEAS-2B;γ-丁内酯;4-羌基丁醋内酯 1,4-Butyrolcctonq;1,4-Butcnolidq;1,2-Butcnolidq;γ-xy7noxybutyric ccid lcctonq;4-xy7noxybutyric ccid-γ-lcctonq

HKC细胞，人胚肾上皮细胞 大鼠肺泡巨噬细胞,NR8383细胞 CL-0381MDA-MB-175VII(人导管癌细胞)5×106cells/瓶×22-典本加醋酯 Mqthyl 2-iodobqnzoctq 610-97-9

C918(人眼脉络色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2肌醇5克RT

HWP-c visceral 人类白前脂肪细胞(HWP)内脏 500,000cells 人肠微内皮细胞HIMEC(多聚蛋白胨)
细胞名称 种属外消旋α-羟基布洛芬rac α-Hydroxy Ibuprofen质量规格：美国进口

REG4 Others Mouse 小鼠 REG4 / GISP / RELP 人细胞裂解液 (阳性对照) (R)-布洛芬(R)-Ibuprofen质量规格：美国进口

小鼠成纤维细胞(EGFP标记)(S)-布洛芬(S)-Ibuprofen质量规格：美国进口

ICAM2 Others Mouse 小鼠 ICAM-2 / CD102 人细胞裂解液 (阳性对照) 依那普利Enalapril质量规格：美国进口

人间充质干细胞-骨髓RNAHMSC-bm miRNA5 μg1,3-二苄基-5-氟尿嘧啶1,3-Dibenzyl-5-fluorouracil质量规格：美国进口
禾谷镰刀菌PCR检测试剂盒价格HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系3-磺炳基十六烷基二甲甜菜碱3-(N,N-Dimethylpalmitylammonio)propanesulfonate(SHDAB)质量规格：>98%,BR

EB病毒转化的人B细胞(彝族);HYL 人腹膜内皮细胞完全培养基 100mLDBD-ED [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(2-氨基乙基氨基)-2,1,3-苯并恶二唑]DBD-ED [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(2-aminoethylamino)-2,1,3-benzoxadiazole] 质量规格：用于高效液相色谱标记

牛脑垂体提取物BPEAABD-SH (=4-乙酰氨基-7--2,1,3-苯并恶二唑](>94.0%(HPLC))AABD-SH (=4-Acetamido-7-mercapto-2,1,3-benzoxadiazole) 质量规格：>94.0%(HPLC)

EPHB2 Others Mouse 小鼠 EphB2 / Hek5 人细胞裂解液 (阳性对照) 9-(溴甲基)丫啶(>98.0%(HPLC)(T))9-(Bromomethyl)acridine 质量规格：>98.0%(HPLC)(T)

人细胞;SF17DBD-COCl [=4-(N,N-二甲基氨磺酰)-7-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-2,1,3-苯并恶二唑](>98.0%(T))DBD-COCl [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(N-chloroformylmethyl-N-methylamino)-2,1,3-benzoxadiazole]质量规格：>98.0%(T)
CM-R034大鼠肝动脉内皮细胞完全培养基100mL1-氮杂-15-冠-5-(>98.0%(T))质量规格：>98.0%(T)1-Aza-15-crown 5-Ether

SGC-7901/VCR细胞，人耐VCR胃腺癌细胞 人神经细胞,BT-325细胞 SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-71-氮杂-18-冠-6-(>98.0%(GC)(T))质量规格：>98.0%(GC)(T)1-Aza-18-crown 6-Ether

COS-7(非洲绿猴SV40转化的肾细胞) 5×106cells/瓶×21-氮杂-12-冠4-(>98.0%(T))质量规格：>98.0%(T)1-Aza-12-crown 4-Ether

CA12 Others Human 人 CA12 人细胞裂解液 (阳性对照) 4'-乙酰苯并-15-冠-5-(>95.0%(GC))质量规格：>95.0%(GC)4'-Acetylbenzo-15-crown 5-Ether

人胎儿胸腺细胞株;HFT-8810 [HFT8810]1,3-二氨基胍盐酸盐 质量规格：>98%1,3-Diaminoguanidine Monohydrochloride
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。