【产品名称】: 杰米斯顿病毒PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Germiston VirusRTPCR
【货号】: BKP3730

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

杰米斯顿病毒PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

VERO细胞，非洲绿猴肾细胞 人大细胞细胞,NCI-H661细胞 CL-0420R 1610(仓鼠肺细胞)5×106cells/瓶×2二(2-乙基己基)嶙酸酯，英文名或英文缩写：P-204，级别：BR，25-28%，规格：500克

仓鼠肾细胞;HL-1本迷;大茴香迷;茴香迷;氧基本;基本基迷 cnisolq;Mqthoxybqnzqnq

GRN Others Human 人 Granulin / GRN 人细胞裂解液 (阳性对照) READYLADDER,50BPDNAMARKERDNA MARKER生物技术级暗紫色不透明液体FROZENsigma

GC-1, 鼠精原细胞钨酸钾，英文名或英文缩写：potewwium tungstate，级别：AR，95%，规格：500克

CD40LG Others Cynomolgus 食蟹猴 CD40L / CD154 / TNFSF5 人细胞裂解液 (阳性对照) (转铁蛋白)
肾系膜细胞Many types of cells包装：5 ×105方(1ml)双羟萘酸（标准品）Pamoic acid质量规格：含量测定

AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人细胞裂解液 (阳性对照) 酚酞（标准品）Phenolphthalein质量规格：含量测定

大鼠上皮细胞完全培养基 100mL香草醛（熔点标准品） Vanillin质量规格：熔点测定

BRL大鼠肝细胞 Rat hepatic cells BRL DMEM+10%FBS环吡酮;环匹罗司Ciclopirox质量规格：>99%,BR

IGFBP7 Protein Human 重组人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 (Fc 标签)环吡酮;环匹罗司(标准品)Ciclopirox质量规格：HPLC>99%,标准品
滑膜细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)4-硝基邻苯二甲腈(>98.0%(GC))4-Nitrophthalonitrile质量规格：>98.0%(GC)

TNFRSF11A Others Rat 大鼠 TNFRSF11A 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-硝基邻苯二甲腈(>98.0%(GC))3-Nitrophthalonitrile质量规格：>98.0%(GC)

大鼠大隐内皮细胞完全培养基 100mL4,4'-双甲氧基三苯甲基氯DMT-CL质量规格：>97%

293FT人胚肾细胞-用于慢病毒包装 Human embryonic kidney cell line 293FT - for leiviral packaging 人胚肾细胞N-苯甲酰-N-苯基羟胺;钽试剂;BPHAN-Phenylbenzohydroxamic Acid;Tantalon质量规格：>98%;AR

IFNA14 Protein Mouse 重组小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 蛋白 (His 标签)6-氯鸟嘌呤核苷6-Chloroguanosine质量规格：>98%,BR
杰米斯顿病毒PCR检测试剂盒说明书中国仓鼠肺细胞;V79异莲心碱（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Isoliensinine

GHR Others Mouse 小鼠 GHR 人细胞裂解液 (阳性对照) 莲心碱高氯酸盐（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Liensinine Perchlorate

细胞冻存液CFM丁1基苯酞（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品川芎提取,液体3-Butylidenephthalide

FLT3 Others Mouse 小鼠 FLT-3 / CD135 / FLK-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 茯苓酸（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Pachymic acid

人胃腺癌细胞;BGC-823大黄素(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Emodin
PCR检测试剂盒

杰米斯顿病毒PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。