本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
【产品名称】: 草鱼呼肠孤病毒2型PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Grass carp reovirus(GCRV)2RTPCR
【货号】: BKP3742
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

草鱼呼肠孤病毒2型PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

NCI-H209(人小细胞细胞) 5×106cells/瓶×2 MRC-5(胚肺细胞)移液器P5000shēng huà shì jì容量：RT，避光100克

MLF, 小鼠成纤维细胞5-录水杨醋;5-录-2-羌基本加醋 5-Chlorosclicylic ccid;5-Chloro-2-xy7noxybqnzoic ccid 31-14-

USP7 Others Human 人 USP7 / HAUSP (aa 208-560) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸丫啶shēng huà shì jì容量：2～8℃250克

人胚胎胰腺组织来源细胞;CCC-HPE-2AmberliteXAD761离子交换大孔吸附树脂1克

J-1111细胞，单核细胞 人细胞,NCI-H1650细胞 CL-0436SF17(人细胞)5×106cells/瓶×2(5’-1酸吡哆醛)
人细胞;PANC-1溴-6氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(>98%,BR)Magenta-Gal质量规格：>98%,BR

P815细胞，肥大细胞瘤细胞 人顺铂耐药株,SGC7901/DDP细胞 非洲绿猴肾细胞系/HCV-E2;Vero-HCV-E2柠檬酸镁九水(>98%,BR)Magnesium  nonahydrate质量规格：>98%,BR

大鼠细胞;MMQ十二烷基硫酸镁(分子生物学)Magnesium dodecyl sulfate质量规格：>85%,分子生物学级

RK2 Others Human 人 RK2 / k-B / KB 人细胞裂解液 (阳性对照) 氟化镁(>98%,BR)Magnesium fluoride质量规格：>98%,BR

髓核细胞培养基NPCM-prf氢氧化镁(>99%,BR)Magnesium hydroxide质量规格：>99%,BR
草鱼呼肠孤病毒2型PCR检测试剂盒说明书人细胞;HOSDMT保护性-2'-甲氧基尿苷DMT-2'-OMe-U质量规格：>98%,BR

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞;PC-12 [PC12] T细胞细胞，HuT78细胞 Mv.1.Lu(NBL-7)细胞，貂肺上皮细胞5’-DMT-2’-TBDMS-Bz-rC5’-DMT-2’-TBDMS-Bz-rC质量规格：>98%,BR

SKOV3 [SK-OV-3], 人腺癌细胞系 Human5’-DMT-2’-TBDMS-rU5’-DMT-2’-TBDMS-rU质量规格：>98%,BR

LCN1 Others Human 人 LCN1 / VEGP / Lipocalin-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 5’-DMT-2’-TBDMS-iBu-rG5’-DMT-2’-TBDMS-iBu-rG质量规格：>98%,BR

组织源性原代细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)/1ml5’-DMT-2’-TBDMS-Ac-rC5’-DMT-2’-TBDMS-Ac-rC质量规格：>98%,BR
人肾皮质近曲小管上皮细胞;HK-2羧甲淀粉钠shēng huà shì jì容量：5克

CLEC6A Others Human 人 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 酸激酶 Pyruvate Kinase from rabbit muscle 9001-59-6 1KU 通用试剂

C57BL/6小鼠骨髓间质干细胞 C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cells衣康醋;亚基琥珀醋;2-亚基丁二醋;分解屋头醋 Itcconic ccid;Propylqnqdiccrboxylic ccid 97-62-4

HSC1细胞，人色素瘤细胞 罗伊氏乳杆菌 人B细胞瘤细胞;RAMOS(RA.1)3，5-二甲基-3-5克

WPMY-1(人正常基质永生化细胞) 5×106cells/瓶×21121-60-42-;-2-; 2-; 2-醛基2-Pyridinecarboxaldehyde;Pyridine-2-aldehyde; Picolinaldehyde; 2-Pyridyla dehyde; 2-Pyridinecarbaldehyde;

PCR检测试剂盒：

草鱼呼肠孤病毒2型PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。